[发明专利]基于化学衍生化与HPLC-MS的不饱和脂肪酸定量方法

权利要求书

1.一种高效液相-质谱联用的不饱和脂肪酸定量检测方法，其包括以下步骤：

1)以直接质谱分析确定脂肪酸的标准优化锥电压和碰撞能量电压；

2)以不饱和脂肪酸A作为内标，将内标和标准品脂肪酸进行碳碳双键环氧化，并通过HPLC-ESI-MS方法进行检测，建立标准品脂肪酸与内标的标准曲线；

3)将待测脂肪酸进行碳碳双键环氧化；

4)将环氧化的待测脂肪酸以内标法，通过HPLC-ESI-MS方法进行检测，检测待测脂肪酸的含量，并在步骤1)所得的标准曲线上进行回归，得到待测脂肪酸的含量。

2.根据权利要求1所述的不饱和脂肪酸定量检测方法，其特征在于，所述的碳碳双键环氧化方法为以单过硫酸氢钾复合盐(Oxone)作为氧化剂，四氢噻喃-4酮1，1-二氧化物作为催化剂进行环氧化反应。

3.根据权利要求1-2任一项所述的不饱和脂肪酸定量检测方法，步骤3)为在脂肪酸的有机溶剂中加入过硫酸氢钾和四氢噻喃-4-酮1,1-二氧化物，同时加入EDTA二钠盐溶液，并将pH调节到7-8；在40-80℃下反应至完全，以有机溶剂萃取后干燥有机层，得到环氧化产物。

4.根据权利要求1-3任一项所述的不饱和脂肪酸定量检测方法，其特征在于，步骤2)中，标准曲线通过以下方法获得：

2-1)在不同浓度的标准品脂肪酸中分别加入内标；

2-2)将步骤2-1)所得混合物分别进行碳碳双键环氧化；

2-3)以高效液相-质谱联用检测，保持内标浓度不变，根据不同油酸浓度下检测其环氧化产物和内标的环氧化产物的强度比建立标准曲线。

5.根据权利要求1-4任一项所述的不饱和脂肪酸定量检测方法，步骤2)中，标准曲线中标准品的浓度为4-6个梯度浓度。

6.根据权利要求1-5任一项所述的不饱和脂肪酸定量检测方法，其特征在于，所述的待测脂肪酸来自血液样本，并通过以下方法处理获得，

a)将血浆样品中加入甲醇和缓冲液稀释，然后加入甲酸酸化；

b)加入乙酸乙酯震荡并离心，取上清液并以乙酸乙酯震荡后离心，取上清液吹干即得待测脂肪酸。

7.根据权利要求1-6任一项所述的不饱和脂肪酸定量检测方法，其特征在于，不饱和脂肪酸A选自人体血浆中不存在或者含量极少的不饱和脂肪酸，优选为十七烯酸。

8.一种检测生物样本中不饱和脂肪酸精确定量检测方法，其包括从生物样本中提取不饱和脂肪酸的步骤，并通过权利要求1-7任一项所述的检测方法，检测不饱和脂肪酸含量。