[发明专利]基于化学衍生化与HPLC-MS的不饱和脂肪酸定量方法

说明书

本发明公开了一种基于化学衍生化与HPLC‑MS的不饱和脂肪酸定量方法1)以直接质谱分析确定脂肪酸的标准优化锥电压和碰撞能量电压；2)以不饱和脂肪酸A作为内标，将内标和标准品脂肪酸进行碳碳双键环氧化，并通过HPLC‑ESI‑MS方法进行检测，建立标准品脂肪酸与内标的标准曲线；3)将待测脂肪酸进行碳碳双键环氧化；4)将环氧化的待测脂肪酸以内标法，通过HPLC‑ESI‑MS方法进行检测，检测待测脂肪酸的含量，并在步骤1)所得的标准曲线上进行回归，得到待测脂肪酸的含量。本发明对脂肪酸的异构体进行准确的定量检测，并且简化了定量的流程，提高了定量检测的准确性。

技术领域

本发明涉及液质联用技术领域，特别是涉及一种用于利用脂肪酸环氧化衍生物来进行定性定量检测的液质联用方法。

背景技术

脂肪酸是中性脂肪、磷脂和糖脂的主要成分。在有充足氧供给的情况下，脂肪酸可氧化分解为CO₂和H₂O，并释放大量能量，因此脂肪酸是机体主要能量来源之一¹。脂肪酸在人体中通常以酯化形式存在，作为中性脂、磷脂和糖脂等脂质的组分。酯化脂肪酸在磷脂酶的作用下水解得到游离脂肪酸(free fatty acids，FFA)，游离脂肪酸为非酯化的脂肪酸，是类脂代谢物的重要组成部分。一方面，外源性的脂肪通过血浆转运，以游离脂肪酸的形式进入脂肪细胞，再合成脂肪储存，同时机体内的内源性脂肪主要在肝脏中合成，也通过血浆转运而进入脂肪细胞储存；另一方面，储存的脂肪不断降解，以游离脂肪酸的形式进入各组织被氧化利用，使脂肪代谢处于动态平衡。研究表明，游离脂肪酸与糖、脂代谢异常²及其他心血管病，如肥胖、高血压、高胰岛素血症、Ⅱ型糖尿病等关系密切^3-4。

同时，由于结构的差别，脂肪酸的种类繁多，不同结构的脂肪酸在生物体的生命活动中起到的意义也不尽相同⁵。短链脂肪酸由于易挥发，所以在生物体中以及食物中积累的含量较少，其最大的功能是提供能量，如丁酸(C₄H₈O₂)，其还有调节免疫应答和炎症反应，同时具有抑制肿瘤生长，促进细胞分化和凋亡的作用⁶。长链脂肪酸则是生物体中累积的脂肪酸的主要组成成分，碳链长短不同，其性质也有差异⁷，研究中发现膳食中月桂酸(C₁₂H₂₄O₂)和肉豆蔻酸(C₁₄H₂₈O₂)可以增加血清中胆固醇含量，棕榈酸(C₁₆H₃₂O₂)则能降低血清中胆固醇的含量⁸。同时由于饱和脂肪酸以及不同饱和度的不饱和脂肪酸在生物体中承担的生命意义也有所不同^9-10，关于多不饱和脂肪酸ω-6PUFA和ω-3PUFA的研究表明，多不饱和脂肪酸对脑、视网膜和神经组织发育有影响。此外，ω-3PUFA对肿瘤有较好的抑制作用。Spencer等¹¹的研究表明，ω-3PUFA能够抑制肿瘤新生血管的形成，其作用机制可能与血管内皮生长因子有关。而ω-6PUFA却会促进癌细胞的转运，促进癌症的增殖¹²。因此，研究ω-3PUFA与ω-6PUFA在人体组织中的比例关系，对癌症的研究具有极其重要的意义。