[发明专利]一种基于高通量测序的IGH基因重排检测方法

权利要求书

1.一种非诊断目的的基于高通量测序的IGH基因重排检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1）根据已知的IGH基因序列，设计及合成扩增引物；

步骤2）采用扩增引物对扩增片段进行多重扩增反应，获得IGH扩增引物；

步骤3）对IGH扩增产物进行纯化，并对纯化后的产物进行末端修饰；

步骤4）将修饰后的扩增产物与高通量测序平台的接头进行连接并进行连接修复，对连接修复产物进行纯化，得到高通量测序文库；

步骤5）将高通量测序文库上机测序及数据分析；

其中，所述扩增引物包括正向引物和反向引物，所述正向引物的设计位置分别位于FR1、FR2和FR3区域，所述反向引物的设计位置位于保守区J区；

所述FR1区的正向引物的序列如SEQ ID No. 1~23所示，FR2区的正向引物的序列如SEQID No.24~57所示；FR3区的正向引物的序列如SEQ ID No. 58~90所示；J区的反向引物如SEQ ID No.91~94所示。

2.根据权利要求1所述的IGH基因重排检测方法，其特征在于，在所述步骤2）中，根据扩增片段进行分组多重扩增，扩增完成后将各组扩增产物进行混合，以得到完全的IGH扩增产物，所述多重扩增采用Taq DNA聚合酶。

3.根据权利要求1所述的IGH基因重排检测方法，其特征在于，在所述步骤3）中，IGH扩增产物进行磁珠法纯化，采用T4多核苷酸激酶对纯化后的产物进行末端加A修饰。

4.根据权利要求1所述的IGH基因重排检测方法，其特征在于，在所述步骤4）中，将修饰后的扩增产物与用T4 DNA连接酶与高通量测序平台的接头P1和Barcode进行连接，并加入DNA聚合酶进行连接修复，对连接修复产物进行纯化，得到所述高通量测序文库；该步骤还包括使用文库定量试剂对建好的文库进行定量。

5.根据权利要求1所述的IGH基因重排检测方法，其特征在于，在步骤5）中，数据分析得到的结果包括：用生物信息学方法可得到大量序列信息，存在单克隆的序列可得到具体的克隆比例，通过免疫数据库比对，还可得到IGH基因序列的结构信息。

6.根据权利要求1所述的IGH基因重排检测方法，其特征在于，检测出的IGH基因重排序列包括SEQ ID No. 95。

7.一种基于权利要求1-6任一项所述IGH基因重排检测方法的用于IGH基因重排的高通量测序检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：FR1区的正向引物、FR2区的正向引物、FR3区的正向引物、J区的反向引物、多重PCR扩增试剂、磷酸化试剂、测序接头连接试剂。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述FR1区的正向引物的序列如SEQ IDNo. 1~23所示，FR2区的正向引物的序列如SEQ ID No.24~57所示；FR3区的正向引物的序列如SEQ ID No. 58~90所示；J区的反向引物如SEQ ID No.91~94所示。

9.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述多重PCR扩增试剂包括Taq DNA聚合酶和扩增缓冲液；磷酸化试剂包括T4多核苷酸激酶、dNTP和反应缓冲液；测序接头连接试剂包括T4 DNA连接酶、DNA聚合酶、接头P1、接头Barcode 及缓冲液。

10.一种用于IGH基因重排的高通量测序检测的系统，其特征在于，所述系统包括如权利要求7~9中任一项所述的用于IGH基因重排的高通量测序检测的试剂盒和高通量测序平台。