[发明专利]一种新型生物碱化合物及发酵制备该化合物的疣孢菌株

权利要求书

1.一种生物碱化合物用于制备抗菌药物的用途，其特征在于，所述生物碱化合物具有如下所示的结构：

2.一种疣孢菌株，其分类命名为Verrucosispora gifhornensis.FIM06-0036，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.16548。

3.权利要求2所述的疣孢菌株用于发酵制备权利要求1中所述生物碱化合物的用途。

4.一种发酵代谢生产权利要求1中所述生物碱化合物的方法，其特征在于，包括将权利要求2所述的疣孢菌株接种于适宜发酵培养基中进行发酵培养的步骤。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基包括如下组分：蛋白胨1.0-3.0g/L，糖蜜4.0-6.0g/L，蔗糖15.0-25.0g/L，MgSO₄·7H₂O 0.1-0.3g/L，FeSO₄·7H₂O0.05-0.2g/L，CaCO₃ 4.0-6.0g/L，KI 0.4-0.7g/L，海水配制，调pH7.5。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法还包括将所述菌株接种于种子培养基中进行种子液培养的步骤，所述种子培养基包括如下组分：可溶性淀粉12.0-18.0g/L，酵母粉4.0-6.0g/L，蛋白胨4.0-6.0g/L，葡萄糖4.0-6.0g/L，K₂HPO₄ 0.4-0.6g/L，MgSO₄·7H₂O 0.4-0.6g/L，海盐15.0-18.0g/L，(NH₄)₂SO₄ 0.4-0.6g/L，CaCO₃ 0.8-1.2g/L，纯水配制，调pH7.5。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述方法还包括将所述菌株接种于高氏天冬素固体斜面培养基进行活化培养的步骤，所述固体斜面培养基包括如下组分：可溶性淀粉15.0-25.0g/L，天冬素0.4-0.6g/L，海盐15.0-18.0g/L，KNO₃ 0.8-1.2g/L，K₂HPO₄ 0.4-0.6g/L，MgSO₄·7H₂O 0.4-0.6g/L，CaCO₃ 0.8-1.2g/L，琼脂10.0-15.0g/L，纯水配制，自然pH值。

8.根据权利要求4-7任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括对所述生物碱化合物进行提取的步骤，具体包括：

(1)收集发酵液经固液分离，分别得到菌丝体和上清夜；

(2)取收集的菌丝体加甲醇进行超声提取，并经减压浓缩去除甲醇得到浸膏Ⅰ；

(3)将所得浸膏Ⅰ与收集的上清液合并，并加入乙酸乙酯进行萃取，并经减压浓缩去除乙酸乙酯，得到浸膏Ⅱ；

(3)将所得浸膏Ⅱ加入硅胶拌样，以干湿法装柱后，用体积比为10：1-1：1的氯仿-甲醇溶剂进行洗脱；

(4)收集洗脱液，以体积比1：2的石油醚：乙酸乙酯为展层剂、紫外灯显色进行TLC检测，合并相同组份，并收集TLC检测Rf值为0.44的组分；

(5)取组份3经Sephadex LH-20柱层析，以甲醇为洗脱剂，合并相同组份，并收集Rf值为0.48的组分；

(6)收集组份2经反相C₁₈色谱柱层析制备，以体积比75：100的乙腈-水进行洗脱，合并相同组分，并收集Rf值为0.52的组分，获得所需生物碱化合物。