[发明专利]一种生防菌HN-2及提取物在制备抑制病原真菌制剂上的应用

说明书

本发明涉及微生物领域，公开了一种生防菌HN‑2及提取物在制备抑制病原真菌制剂上的应用。所述生防菌HN‑2为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)HN‑2，保藏编号为CCTCC NO:M 2018382。其菌株及从其菌株发酵液中提取得到的提取物对有很强的抑制芒果炭疽病病原真菌的能力，其抑菌效果好，抑菌率高。只需对菌株发酵液经过简单的处理即可直接获得有效成分，制备方法简单，成本低廉，具有开发成拮抗芒果炭疽病病原真菌的新型生物农药的价值。

技术领域

本发明涉及微生物领域，特别是一种生防菌HN-2及提取物在制备抑制病原 真菌制剂上的应用。

背景技术

芒果炭疽病是芒果生长期及储藏期的主要病害之一。它是由胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloesporioides Penz)侵染所引起的真菌病害，主要危害芒果的 嫩稍、叶片、花和果实，造成稍枯、落花落果等。目前主要的防治措施为抗病 品种的种植以及化学农药的使用。常用的化学药剂主要为：多菌灵、咪鲜胺和 代森锰锌等。代森锰锌为保护性农药，其杀菌范围广且不易产生抗性。但锰锌 制剂会引起作物微量元素积累中毒。咪鲜胺可以抑制麦角甾醇生物合成，兼具 保护和铲除作用，可对多数子囊菌和半知菌病害有显著防效。咪鲜胺属于低毒 杀菌剂，对哺乳动物和鸟类均低毒(姚庚西，2015)。多菌灵为苯并咪唑类化合 物，是一种高效低毒的内吸性农药，具有保护和治疗的作用。但高浓度的多菌 灵会对植物和动物产生危害，在美国和欧盟国家多菌灵为禁用药(魏中华、徐 娟等，2015)。同时，长期使用化学药剂，不仅化学药剂的残留会对环境造成危 害，还会导致芒果炭疽病病原真菌产生变异从而使药剂失效。

脂肽类物质是芽孢杆菌通过非核糖体途径合成的一类具有广谱抑制病原菌 的活性化合物，该种活性成分具有低毒高效、不容易产生抗药性等特点，具有 较好的生防潜力，是近年的研究重点，如何从从自然界中挖掘产生该类物质的 菌株和如何提高芽孢杆菌产生脂肽类物质的产量也是研究的热点。

发明内容

本本发明提出一种生防菌HN-2及提取物在制备抑制病原真菌制剂上的应 用。

本发明的技术方案是这样实现的：

一种生防菌HN-2在制备抑制病原真菌的制剂上的应用，所述生防菌HN-2 为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)HN-2，其保藏编号为CCTCC NO:M 2018382。

一种生防菌HN-2的提取物在制备抑制病原真菌的制剂上的应用，所述的提 取物是从权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌HN-2中提取得到的。

进一步，所述的病原真菌为芒果炭疽病病原真菌。

进一步，所述的提取物为贝莱斯芽孢杆菌HN-2发酵液离心后所得的上清 液，通过正丁醇萃取、酸沉淀和/或硫酸铵沉淀得到的脂肽类物质。

进一步，所述的发酵液的制备方法为：将保存的生防菌菌株HN-2接种于 LB培养基上28℃活化培养，培养2天，挑取适量生防菌HN-2加入到液体的LB 培养基中，摇床28℃，180转/分钟摇菌48小时，即得发酵液。

进一步，所述的正丁醇萃取的操作方法为：发酵液离心去除菌体，即得即 无菌体发酵液；加入正丁醇萃取，分离得到上层正丁醇层，去除正丁醇溶剂即 得提取物。

进一步，所述加入的正丁醇与无菌体发酵液的体积比为1:1。

进一步，所述的酸沉淀的操作方法为：发酵液离心去除菌体，保留上清液， 加入盐酸滴定至PH值为2，密封后冷藏，之后离心，弃去上清液，得到沉淀即 可。

进一步，所述的步骤(2)中，滴定所用的盐酸的摩尔浓度为2mol/L；冷 藏的条件为4℃冷藏12小时，离心时控制转速10000转/分钟，离心10分钟。