[发明专利]一种用于检测可溶性生长激素表达基因2蛋白的试剂盒

权利要求书

1.一种将抗体固定至胶乳微球的改进方法，包括步骤：

1）在10 mmol/l 至1000mmol/l硼酸缓冲液pH 9.0中提供抗体；

2）在10 mmol/l 至1000mmol/l硼酸缓冲液pH 9.0中提供胶乳微球；

3）将所述抗体和所述胶乳微球在20℃至25℃混合7至9小时得到第一混合物，震荡混合；

4）提供交联剂碳二亚胺；

5）将所述交联剂和所述第一混合物在45℃至55℃接触2至4小时，得到交联有抗体的胶乳微球；

6）将所述交联有抗体的胶乳微球和封闭体系在15℃至28℃接触1小时至24小时；

其中：

步骤1）和步骤2）可互换顺序；

所述步骤4）分别和步骤1）、2）、3）可互换顺序；

所述胶乳微球的表面官能团是羧基；

所述胶乳微球的平均粒径为350nm至450nm；

所述封闭体系包含封闭剂、pH为5.0至8.0的封闭缓冲剂、和表面活性剂；

所述封闭剂包含：按w/v计1% 分子量为1000至5000的聚乙二醇多胺、按w/v计1 %牛血清白蛋白；

所述封闭缓冲剂选自：磷酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、HEPES缓冲液；

所述表面活性剂选自以下的一种或组合：按w/v计2.0%至8.0%Triton X、按w/v计2.0%至8.0%Tween、按w/v计2.0%至8.0%AEO。

2.根据权利要求1所述的方法，封闭步骤后还任选包括选自以下的一个步骤或组合：

清洗交联有抗体的胶乳微球、离心并收获交联有抗体的胶乳微球、包装交联有抗体的胶乳微球。

3. 一种可溶性生长激素表达基因2蛋白的检测试剂盒，其包含：

- 第一试剂、

- 第二试剂、

其中，所述第一试剂包含：

按w/v计1% Thesit、

按w/v计0.1%叠氮钠、

5KU/L脂肪酶、

按w/v计2% 胆酸钠、

5mmol/l CaCl₂、

按w/v计2.0%甲基丙烯酰氧基磷脂胆碱、

按w/v计3%阻断剂HBR-8^TM、

200mmol/l Tris缓冲液，pH7.4；

所述第二试剂包含：

按w/v计0.15%的400nm胶乳微球、

20μg/ml sST2抗体Fab片段、

100mmol/L甘氨酸缓冲液pH8.0、

按w/v计0.1%NaCl、

按w/v计0.5%甲基丙烯酰氧基磷脂胆碱、

按w/v计0.1%NaN₃；

所述胶乳微球的表面官能团是羧基；

通过权利要求1或2所述的方法，将所述sST2抗体Fab片段共价结合至所述胶乳微球的表面。

4.根据权利要求3所述的可溶性生长激素表达基因2蛋白的检测试剂盒，其还包含校准品、和/或质控品。

5.根据权利要求4所述的可溶性生长激素表达基因2蛋白的检测试剂盒，其中：

所述校准品包含：25g/mL、50g/mL、100g/mL、200g/mL、或400ng/mL sST2蛋白；

所述质控品包含：30g/mL或100ng/mL sST2蛋白；

所述质控品或校准品包含选自以下的缓冲剂：磷酸盐缓冲液、HEPES缓冲液、MOPS缓冲液、MES缓冲液、PIPES缓冲液；

所述缓冲剂浓度为5 mmol/至250mmol/L；

所述缓冲剂pH为4.0-8.0；

所述质控品或校准品包含按w/v计1.0%至10%的保护剂，其选自：牛血清白蛋白、糖、醇；

所述质控品或校准品包含按w/v计0.05%至1.5%的防腐剂，其选自：叠氮钠、PC、二硫苏糖醇。

6.根据权利要求5所述的可溶性生长激素表达基因2蛋白的检测试剂盒，其中：

所述试剂盒包含校准品和/或质控品，其包含sST2、100mmol/L 磷酸缓冲液pH 5.5、150mmol/L NaCl、按w/v计5%BSA、按w/v计10%山梨醇、按w/v计0.1%NaN₃。