[发明专利]一种细胞培养基添加剂

说明书

本发明提供了一种细胞培养基添加剂，该细胞培养基添加剂包括羊胚胎或羊胎盘提取液；以及动物血清/浆，还包括抗氧化因子。本发明制备的羊胚胎或羊胎盘提取液中包含各种蛋白、生长因子，小分子营养物质，如丙种球蛋白、白蛋白、转铁蛋白等，这些有效物质能够促进细胞的生长，且该提取物安全性高，成本低，与动物血清/浆结合，能够有效的为各类细胞生长、传代等提供营养物质，可代替进口胎牛血清等昂贵成分，且能够保持各类细胞的有效培养、传代等。

技术领域

本发明属于细胞培养技术领域，具体涉及一种细胞培养基添加剂。

背景技术

目前最常用的培养基添加剂为胎牛血清，一般实验室用的进口胎牛血清价格昂贵，500ml胎牛血清通常需要花费3000元-4000元人民币，细胞培养成本很高。此外，胎牛血清由于其潜在的疾病传染的可能，不能用于临床。但若用市售的无血清培养基成本更高，通常500ml无血清培养基需要花费人民币超过2000元。因此，开发一种成本低、能保证细胞正常生长且安全的培养基添加剂是非常有意义的。

发明内容

针对现有技术中存在的上述问题，本发明提供一种细胞培养基添加剂，可有效解决现有的培养基添加剂成本高，不安全的问题。

为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种细胞培养基添加剂，包括：

羊胚胎或羊胎盘提取液；以及

动物血清/浆；其中羊胚胎或羊胎盘提取液添加到细胞培养基中的终浓度为0.15-0.45mg/ml，动物血清/浆体积为培养基体积的1-5％。

进一步地，一种细胞培养基添加剂，还包括抗氧化因子。

进一步地，羊胚胎或羊胎盘提取液通过以下方法制备得到：

(1)将羊胚胎或羊胎盘用含抗生素的生理盐水清洗干净，切块，粉碎，然后按1g：2-3ml的比例向组织中添加提取溶剂，匀浆；

(2)于0-40℃条件下搅拌匀浆3-6h，使其成粥糜状，并调pH值为4.9-5.0，目的是在此等电点沉淀不必要的蛋白质；

(3)将步骤(2)所得物离心，取上清，并调节上清液pH值为6.3-6.4，然后于55-65℃热处理8-12min，目的是在此等电点沉淀不耐热酶和蛋白质；

(4)重复步骤(2)和步骤(3)1-2次；

(5)将热处理后的物质离心，取上清，进行灭活，并调节pH值至7.0-7.4，目的是使其接近活细胞状态，然后再用超滤膜包处理，制得羊胚胎或羊胎盘提取液。

进一步地，羊胚胎或羊胎盘来源于山羊或绵羊，优选为绵羊孕中、晚期的胚胎。

进一步地，提取溶剂为水、细胞培养基、1％牛磺酸钠溶液或PBS。

进一步地，步骤(2)中调pH值为5.0；步骤(3)中于60℃热处理10min。

进一步地，动物血清/浆来源于动物脐血、胚胎血、富血小板因子血浆。

进一步地，抗氧化因子包括谷氨酰胺、丙酮酸钠和维生素C，谷氨酰胺、丙酮酸钠和维生素C添加到细胞培养基中的终浓度分别为2-3mM、1-2mM、15-30μg/ml。

本发明提供的细胞培养基添加剂，具有以下有益效果：