[发明专利]一种抑制变异链球菌和白色念珠菌双菌生物膜的方法

说明书

本发明公开了一种抑制变异链球菌和白色念珠菌双菌生物膜的方法，属于微生物技术领域。在双菌生物膜形成的不同阶段，植物乳杆菌CCFM8724具有体外抑制变异链球菌和白色念珠菌双菌生物膜的能力，在不同时间作用双菌生物膜能显著减少生物膜的产胞外多糖量和生物膜中致病菌数，并且能够耐受1.6mg/mL的溶菌酶，同时在不同蔗糖浓度下成膜性都较差，均低于0.80以下，说明该植物乳杆菌不会有取代致龋菌形成致龋生物膜的可能。本发明提供的方法具有减少口腔致龋牙菌斑、防治龋齿的功效，有望为益生菌防治龋齿打开一个新的功能市场。

技术领域

本发明涉及一种抑制变异链球菌和白色念珠菌双菌生物膜的方法，属于微生物技术领域。

背景技术

龋病是发生于牙釉质及牙本质上的细菌感染性疾病，而牙菌斑生物膜的形成是龋病发生的先决条件。成熟的牙菌斑生物膜是口腔细菌嵌于不溶性多糖为主的基质内形成的一种三维立体的生态环境，富含空隙及管道系统，具有一定厚度。一旦由于宿主、饮食、微生物的生长等因素的变化而导致该生态失衡时，牙菌斑生物膜中的致龋微生物成为优势菌群，它们快速代谢分解碳水化合物，尤其是蔗糖，产生有机酸，使pH降低到5.5以下，导致牙釉质脱矿化和牙齿硬组织结构损坏从而形成龋洞。

变异链球菌是公认的主要致龋菌。虽然变异链球菌不是口腔中最丰富的细菌，但它能快速协调致龋性生物膜的形成，并能结合其他致龋菌形成毒力更强的致龋生物膜。与口腔中浮游细菌不同的是，生物膜中的细菌通常营养受限，在这种近似休眠状态下的细菌比浮游的代谢活性细菌更耐抗生素和抑菌剂，此外，许多治疗剂在它们作用细菌之前就与生物膜中的胞外多糖结合，从而失去效用。这也是抗菌剂和抗生素在临床上防治龋齿效果不佳的原因之一。因此，“益生菌疗法”是当前技术开发的热点。

已有研究证明，植物乳杆菌可以抑制变异链球菌的生长从而抑制龋病的程度(CN108486022A公开日：2018.09.04)。但临床调查发现，龋病患者的口腔中通常可同时检出白色念珠菌和变异链球菌(Hajishengallis E等人，Molecular oral microbiology,2017,32(1):24-34.)，因此研究益生菌对变异链球菌与真菌白色念珠球菌的双种生物膜的抑制作用，对于防治龋齿越来越重要。

白色念珠球菌与变异链球菌的关联能够增强变异链球菌的致病性并强化致龋生物膜的形成。白色念珠菌粘附牙面的能力较弱，但与变异链球菌结合后，口腔定植能力大大增强。变异链球菌产生的葡萄糖基转移酶(GTF)可与白色念珠菌细胞壁上的甘露聚糖粘附，将其募集到早期牙菌斑生物膜上(Ellepola K等人，Journal of dental research,2017,96(10):1129-1135.)。具有更大表面积的白色念珠菌可为更多的变异链球菌提供结合位点，增多的变异链球菌数量反过来又增加了白色念珠菌的数量。双种生物膜比单种生物膜具有更高的生物量和细胞数量，且已有研究证实白色念珠菌和口腔链球菌的生物膜对抗生素的耐药性高于单一物种(Shirtliff M E等人，FEMS microbiology letters,2009,299(1):1-8.)，双菌生物膜的这些特性无疑加大了对其导致的龋病治疗的难度。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种抑制变异链球菌和白色念珠菌双菌生物膜的方法，所述方法是利用植物乳杆菌来抑制变异链球菌和白色念珠菌双菌生物膜的形成。

在本实用新型的一种实施方式中，所述植物乳杆菌是植物乳杆菌CCFM8724。

在本实用新型的一种实施方式中，所述变异链球菌是变异链球菌ATCC 25175。

在本实用新型的一种实施方式中，是用植物乳杆菌CCFM8724发酵上清或菌泥在所述双菌生物膜形成的不同阶段进行介导。

在本实用新型的一种实施方式中，所述植物乳杆菌CCFM8724发酵上清或菌泥是将植物乳杆菌CCFM8724在MRS液体培养基中培养，离心后分别得到上清和菌泥。