[发明专利]一种果桑“白玉王”的组织培养方法

权利要求书

1.一种果桑“白玉王”的组织培养方法，其特征在于，所述培养方法包括以下步骤：

(1)材料选择

果桑“白玉王”采摘于沭阳县东小店乡店东村果桑种植园，白玉王当年生、健壮无病虫害的嫩枝枝条上带侧芽的茎段作为外植体；

(2)外植体前处理

每个外植体剪成3-4厘米一段，每段至少有一个侧芽，先用2％洗衣粉浸泡20分钟去除表面污垢后,再用流动的自来水冲洗1小时；

(3)外植体灭菌消毒

对外植体进行前处理后，转入超净工作台进行消毒处理:用75％的酒精灭菌30s，然后用0.1％的升汞加吐温2滴约0.01m l进行浸泡，时间为8-10min，再用无菌水冲洗5遍，最后用无菌滤纸吸干,接入腋芽诱导培养基中；

(4)外植体接种及腋芽诱导培养

先将培养瓶的封口膜轻轻取下，放在一边，将培养瓶口在酒精灯外焰上旋转灼烧消毒，杀死瓶口的微生物；将枪式镊子在酒精灯上灼烧消毒并冷却后，培养瓶中放置腋芽诱导培养基，将外植体接种到培养瓶中的诱导培养基中；

诱导培养基选用：2984.24mg/LMS+0.5-2.0mg/L BA+0.5-3.5mg/L IBA，培养25d～30d后进行无菌苗增殖培养；

(5)增殖培养

外植体经诱导培养生成愈伤组织或丛生芽当长到0.5厘米时，转接至放有增殖培养基的培养瓶中进行增殖培养，增殖培养基可选用：2984.24mg/LMS+0.5-3.5mg/L BA+05-2.0mg/L IBA+100mg/L肌醇+0.2mg/L稀效唑+60g/L淀粉，培养25-30d；

(6)生根培养

选取放有增殖培养基的培养瓶中长度2.0cm～3.0cm生长健壮的芽接种至放有生根培养基的培养瓶，生根培养基可选用：1492.12MS+0.5-2.0mg/L NAA+60g/L淀粉+食用糖30g/L；根苗接入放有生根培养基的培养瓶中培养15-20d后,从试管苗剪口基部长出5-8条嫩白色的幼根，40d后长出完整根系，平均根数6条以上，根长约在4.0cm-6.0cm；

(7)炼苗和移栽

当组培幼苗基部长出4条以上根长4-6cm的新根时，进行炼苗移栽。在移栽前，将放有生根培养基的培养瓶从培养架上轻轻取下，迅速转移到日光温室中，自然散射光下炼苗，温度控制在20℃～25℃，湿度85％，每天中午在培养瓶周围喷洒雾水，以保湿降温，封口炼苗1～2d；然后，将瓶盖打开适应一个星期，然后小心取出苗，不要伤及根系，用自来水冲净根部培养基，移栽至装有黄心土:蛙石按(混合比例为1：1)的混合基质的育苗盘中，栽后浇透水，并喷施800倍液多菌灵，盖膜保湿，遮阴网遮阴，保持温度在25℃左右，相对湿度80％左右。喷水2-3次/d，3d后适当通风，7d后去掉遮阴网并减少喷水次数。