[发明专利]一种基于量子点荧光的食品过敏原快速检测方法

权利要求书

1.一种基于量子点荧光的食品过敏原快速检测方法，其特征在于，包括：

步骤1：采用碳二亚胺法将兔抗虾多克隆抗体共价偶联至量子点表面，形成量子点荧光探针；

步骤2：荧光免疫层析试纸条的构建；

步骤3：将步骤1中的量子点荧光探针与待测样品混合后，进行层析检测。

2.根据权利要求1所述的基于量子点荧光的食品过敏原快速检测方法，其特征在于，所述步骤1具体为：

11)向反应容器中加入量子点溶液10μL，加入碳二亚胺盐酸盐溶液和N-羟基硫代琥珀酰亚胺(sulfo-NHS)溶液，搅拌活化一段时间；

12)再向反应容器中加入兔抗原肌球蛋白多克隆抗体和PBS缓冲液，置于25℃震荡培养箱中避光反应1h；

13)将牛血清白蛋白(BSA)加入到上述复合溶液中，然后4℃保存备用。

3.根据权利要求2所述的基于量子点荧光的食品过敏原快速检测方法，其特征在于，所述步骤11)中，量子点溶液是浓度为5μM的CdSe量子点溶液；所述碳二亚胺盐酸盐为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)。

4.根据权利要求3所述的基于量子点荧光的食品过敏原快速检测方法，其特征在于，所述碳二亚胺盐酸盐和N-羟基硫代琥珀酰亚胺的重量比为1～5:1；所述活化时间为5-10min。

5.根据权利要求2所述的基于量子点荧光的食品过敏原快速检测方法，其特征在于，所述步骤12)中，所述兔抗原肌球蛋白多克隆抗体浓度为3.5mg/mL，用量为50μL；所述PBS缓冲溶液用量为130μL；

所述步骤13)中，所述BAS的最终浓度为1％-1.5％。

6.根据权利要求1所述的基于量子点荧光的食品过敏原快速检测方法，其特征在于，所述步骤2中，所述荧光免疫层析试纸条由底板、样品垫、硝酸纤维素膜和吸水垫组成；所述样品垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次贴附于所述底板上，每种材料间互相重叠2-3mm；使用自动切条机将其裁切，置于塑料试纸条卡壳中，室温干燥保存。

7.根据权利要求6所述的基于量子点荧光的食品过敏原快速检测方法，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上设置有原肌球蛋白检测线和羊抗兔IgG抗体质控线，二者间隔为4-5mm。

8.根据权利要求7所述的基于量子点荧光的食品过敏原快速检测方法，其特征在于，所述原肌球蛋白检测线和羊抗兔IgG抗体质控线的制备方法为：通过使用自动划膜仪，分别将0.8mg/mL原肌球蛋白抗原和1.0mg/mL羊抗兔IgG抗体喷涂于硝酸纤维素膜上，喷涂量为1.0μL/cm，喷涂后将NC膜置于37℃烘箱中干燥。

9.根据权利要求1所述的基于量子点荧光的食品过敏原快速检测方法，其特征在于，所述步骤3具体为：向反应容器中添加10μL量子点荧光探针，并加入待测样品与缓冲液，充分混合反应5min后，滴加至组装好的试纸卡槽中进行层析。

10.根据权利要求9所述的基于量子点荧光的食品过敏原快速检测方法，其特征在于，所述量子点荧光探针、待测样品和缓冲溶液的重量比为：1:1:8。