[发明专利]一种基于量子点荧光的食品过敏原快速检测方法

说明书

本发明公开了一种基于量子点荧光的食品过敏原快速检测方法，属于食品安全及生物技术领域。上述方法包括：步骤1：采用碳二亚胺法将兔抗虾多克隆抗体共价偶联至量子点表面，形成量子点荧光探针；步骤2：荧光免疫层析试纸条的构建；步骤3：将步骤1中的量子点荧光探针与待测样品混合后，进行层析检测。本发明中量子点自身均匀、稳定的特性和其表面可修饰的优点可以大大优化反应体系的状态，从而提供更高的灵敏度、重复性和稳定性，有效降低其检测限，结果更加可靠。

技术领域

本发明涉及食品安全及生物技术领域，特别是指一种基于量子点荧光的食品过敏原快速检测方法。

背景技术

目前已有的研究中，针对过敏原的免疫层析试纸条检测技术的相关报道中，黄素文等使用传统的标记物胶体金检测淡水小龙虾过敏原原肌球蛋白，采用双抗夹心法，以单克隆抗作为检测抗体，达到了100mg/mL的检出限；Daisuke Koizumi等人对甲壳类过敏原原肌球蛋白进行检测，使用胶体金作为标记物，检测限为25mg/mL。

专利CN101881769A公开了一种检测虾过敏原的免疫胶体金层析试纸条及其制备方法，属于免疫学检测技术领域。该发明公开了以虾过敏原-原肌球蛋白的簇特异性抗体与显色物质胶体金的结合物作为检测试剂组装试剂条，进行食品中虾过敏原的检测，成本低廉，快速，便携。该发明应用的抗体是利用提取纯化的原肌球蛋白免疫健康的新西兰大白兔得到的多克隆抗体。

免疫层析试纸方法具有简易、便捷的优势，但目前针对食品过敏原检测的试纸方法中，多采用胶体金这一传统纳米颗粒作为标记物，以颜色的深浅来判定其目标物在溶液中的含量，在灵敏度和重复性上存在一定的限制。

发明内容

为解决现有技术中的不足，本发明提供一种基于量子点荧光的食品过敏原快速检测方法。量子点自身均匀、稳定的特性和其表面可修饰的优点可以大大优化反应体系的状态，从而提供更高的灵敏度、重复性和稳定性，有效降低其检测限，结果更加可靠。

为解决上述技术问题，本发明提供技术方案如下：

本发明提供一种基于量子点荧光的食品过敏原快速检测方法，包括：

步骤1：采用碳二亚胺法将兔抗虾多克隆抗体共价偶联至量子点表面，形成量子点荧光探针；

步骤2：荧光免疫层析试纸条的构建；

步骤3：将步骤1中的量子点荧光探针与待测样品混合后，进行层析检测。

进一步的，所述步骤1具体为：

11)向反应容器中加入量子点溶液10μL，加入碳二亚胺盐酸盐溶液和N-羟基硫代琥珀酰亚胺(sulfo-NHS)溶液，搅拌活化一段时间；

12)再向反应容器中加入兔抗原肌球蛋白多克隆抗体和PBS缓冲液，置于25℃震荡培养箱中避光反应1h；

13)将牛血清白蛋白(BSA)加入到上述复合溶液中，然后4℃保存备用。

优选的，所述步骤11)中，量子点溶液是浓度为5μM的CdSe量子点溶液；所述碳二亚胺盐酸盐为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)；

优选的，所述碳二亚胺盐酸盐和N-羟基硫代琥珀酰亚胺的重量比为1-5:1；所述活化时间为5-10min。

优选的，所述步骤12)中，所述兔抗原肌球蛋白多克隆抗体浓度为3.5mg/mL，用量为50μL；所述PBS缓冲溶液用量为130μL；

所述步骤13)中，所述BAS的最终浓度为1％-1.5％，BSA作为抗体稳定剂加入，能够使得体系保持稳定。