[发明专利]一种均相化学发光法检测促甲状腺激素的试剂盒

说明书

本发明公开了一种能够同时检测促甲状腺激素（TSH）浓度的试剂盒，所述方案通过如下步骤实现：（1）TSH抗体制备；（2）吖啶衍生物标记TSH抗体；（3）Fermin标记TSH抗体（4）夹心法检测。本发明芯片用于检测病人的血液中促甲状腺激素（TSH）浓度的浓度，本方法形成的试剂盒反应步骤简单，检测快速，设备简易化，实现化学发光POCT检测，结果精准，延续化学发光平台的优势，灵敏度高，线性范围宽，稳定性好。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种均相化学发光法检测促甲状腺激素(TSH)的试剂盒。

背景技术

促甲状腺激素(thyrotropin，thyroid stimulating hormone，TSH)是腺垂体分泌的促进甲状腺的生长和机能的激素。人类的TSH为一种糖蛋白，含211个氨基酸，糖类约占整个分子的15％。整个分子由两条肽链——α链和β链组成。TSH全面促进甲状腺的机能，稍早出现的是促进甲状腺激素的释放，稍晚出的为促进T4、T3的合成，包括加强碘泵活性，增强过氧化物酶活性，促进甲状腺球蛋白合成及酪氨酸碘化等各个环节。TSH促进甲状腺上皮细胞的代谢及胞内核酸和蛋白质合成，使细胞呈高柱状增生，从而使腺体增大。腺垂体分泌TSH，一方面受下丘脑分泌的促甲状腺激素释放激素(TRH)的促进性影响，另方面又受到T3、T4反馈性的抑制性影响，二者互相拮抗，它们组成下丘脑-腺垂体-甲状腺轴。正常情况下，下丘脑分泌的TRH量，决定腺垂体甲状腺轴反馈调节的水平。TRH分泌多，则血中T3、T4水平的调定点高，当血中T3、T4超过此调定水平时，则反馈性抑制腺垂体分泌TSH，并降低腺垂体对TRH的敏感性，从而使血中T3，T4水平保持相对恒定。骤冷等外界刺激经中枢神经系统促进下丘脑释放TRH，再经腺垂体甲状腺轴，提高血中T3、T4水平。TSH分泌有昼夜节律性，清晨2～4时最高，以后渐降，至下午6～8时最低。

化学发光法是目前最先进的免疫检测方法学，按标记物不同分为直接化学发光法、酶促化学发光法和电化学发光法；按是否存在分离清洗步骤，分为异相化学发光法和均相化学发光法。目前，在人医体外诊断检测方面，国内外使用直接化学发光法和酶促化学发光法的检测产品较多，都属于异相化学发光法。国外厂家包括雅培、西门子、索林、贝克曼和希斯美康等，国内厂家包括新产业、安图、迈克、迈瑞、泽成、长光华医等。各厂家仪器平台大同小异，尤其是国内厂家，仪器结构复杂、故障率较高，质量参差不齐，影响了客户对产品的信任。同时，国内厂家在试剂品种上未进行大胆的创新，只是重复别人有的品种，使用的原料(抗原抗体)同一来源，导致同质化严重，市场竞争激烈。现阶段仅有西门子一家使用纯态氧介导的均相化学发光法(光激化学发光法)产品上市，检测需要特殊的LOCI模块。LOCI技术是一步式化学发光夹心免疫检测方法，试剂中含有两种合成珠试剂和一种生物素化学的单克隆抗体。第一种珠试剂(敏感珠)包被有链霉亲和素，并含有光敏感染料；第二种珠试剂(化学珠)包被另一种抗体，并含有化学发光染料；样本和化学珠及生物素化抗体进行孵育后形成夹心复合物；然后加入敏感珠，与生物素结合后形成聚集的免疫复合物；复合物在680nm光照射下其中的敏感珠会产生单线态氧，单线态氧弥散到化学珠后可引发化学发光反应，在612nm波长下测量反应所产生的化学发光信号。该方法需要激发光，对设备要求高，标记材料特殊，不易获取。

Lumigen公司发明了一种均相化学发光法，使用化学发光标记物标记抗原或抗体，同时辣根过氧化物酶(HRP)标记另一株抗原或抗体，一起去检测样本中的分析物，在纯液相条件下直接注入激发物质产生化学发光，达到定量检测目的。该方法不仅保证了化学发光法检测性能的优势，同时对检测设备要求降低，设备小型化、简易化。我们将辣根过氧化物酶(HRP)标记改为氯化血红素(hemin,HRP的辅基)标记，使得标记方法和体系更加简单化，避免了不同HRP带来的批间差。

发明内容