[发明专利]唾液中几种类固醇激素的定性定量检测方法

说明书

本发明提供了一种人体唾液中几种类固醇激素的定性定量检测方法，具体涉及一种唾液中8种类固醇激素的液相色谱串联质谱检测方法，所述的激素为17‑羟基孕酮、孕酮、雄烯二酮、睾酮、脱氢表雄酮、皮质醇、皮质酮、醛固酮。该检测方法将人体唾液样本冷冻处理后经蛋白沉淀，超声提取并过滤，随后与内标液混合，反相SPE柱纯化和目标产物的化学衍生。保证了唾液中这几种目标激素的充分溶出，排除唾液中杂质的干扰，确保了检测结果的准确性和稳定性。随后，采用液相色谱分离与质谱离子对检测联用的方法对这8种激素进行同步定性和定量分析。该方法适用于人体唾液中结构类似、化学物理性质接近的激素分子的同步批量检测，具有灵敏度高、精密度高、重复性好、检测速度快等优点。充分满足了临床检验的需要，具有较高的临床应用价值。

技术领域

本发明涉及唾液样本检测技术领域，尤其是涉及一种人体唾液中8种类固醇激素的检测方法。

背景技术

人体内的类固醇激素按药理作用分为肾上腺皮质类固醇激素和性激素两大类。而类固醇激素都是由胆固醇激素为母体合成的，是一类脂溶性激素，它们在结构上都是环戊烷多氢菲衍生物。这些激素的功能虽然很不相同，但它们在结构上却很相似。因为它们都是从胆固醇衍生而来，而且在体内在相应酶的作用下可以相互转变，达到体内类固醇激素代谢通路的平衡状态。胆固醇首先代谢成孕烯醇酮，然后在酶的作用下，一部分转化为孕酮，产生孕激素和下游的盐皮质激素；另一部分转化为17-羟基孕酮和脱氢表雄酮，再分别转化为糖皮质激素以及雄激素。雄激素最后再代谢生成雌激素。因此，体内的类固醇激素代谢是一个完整的通路，各种激素之间存在微妙的平衡关系。某些代谢通路的阻碍或缺失必将影响其它代谢通路的平衡，从而造成体内其它激素水平的变化，引起代谢相关的疾病发生。无论是某些通路上酶的缺失或活性降低，还是外源性激素的介入，都会不可避免的造成代谢通路的失衡。因此，准确的监控体内各类激素的水平变化以及相互之间的比例关系对于这些疾病的预防和风险评估起到至关重要的作用，同时也可以用来监控这些疾病的临床治疗效果和预后恢复评估。

先天性肾上腺皮质增生症(CAH)是一组由肾上腺皮质类固醇合成通路各阶段各类催化酶的缺陷，引起的以皮质类固醇合成障碍为主的常染色体隐性遗传性疾病。患者需要通过终身激素治疗的方法对疾病进行控制。而激素替代治疗的方法必须是个性化，同时必须随时密切监控体内激素及其代谢的反馈。临床上一般通过内分泌激素监测以及体格生长指标、青春发育进程和骨龄监测作为近期的判断指标，两者需有机结合，综合判断。但空腹采血取样检测不便于多点监控，病人依从性差。同时，血样检测各激素测值尚无单个的金标准切割值，各激素参数需结合临床指标调节剂量。而唾液中各种类固醇激素都是以活性物质的形式存在，客观反应了体内真实的激素代谢状况。同时，由于唾液取样为无创取样，方便快捷，不需要专业医护人员的陪同，病人就可以自行多次取样。因此，通过唾液取样的方式对患者体内相关激素含量进行跟踪监测，可以建立个性化的新型激素治疗方案及安全性评价体系。通过唾液检测各类相关激素的水平及比例，在临床上可以指导这类疾病的个性化治疗，也为这类疾病的长期安全性评估提供重要的依据。

因此，本研究开发一种唾液中多种类固醇激素的检测方法。该方法具有检测灵敏度高、重复性好、检测速度快，检测批量大的优点，能高效的对多种激素进行精确的定量检测，具有良好的科研和临床应用前景。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种高效液相色谱联用串联质谱技术检测人体唾液中多种类固醇激素产物的方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

1、一种人体唾液中几种类固醇激素的检测方法，其特征在于，将人体唾液样本冷冻处理后经蛋白沉淀，超声提取并过滤，随后与内标液混合，反相SPE柱纯化和目标产物的化学衍生得到待测样本；

2、将上述待测样本通过液相色谱和质谱联用检测，同步对几种激素进行定性和定量的批量检测；

进一步的，上述步骤1中样本冷冻时间为>24小时、温度为-20℃；