[发明专利]用于BRAF基因全外显子二代测序的多重PCR引物组合物、试剂及控制系统

说明书

本发明提供一种用于BRAF基因全外显子二代测序的多重PCR引物组合物、试剂及控制系统。其中用于BRAF基因全外显子二代测序的多重PCR引物组合物包括SEQ ID NO:01至SEQ ID NO:46所示的引物。本发明提供的所述用于BRAF基因全外显子二代测序的多重PCR引物组合物、试剂及控制系统，解决了以下现有的技术问题：1.现有技术主要检测BRAF基因的点突变，检测范围有限；2.实时荧光定量PCR检测、基因芯片只能检测已知位点；3.Sanger测序检验长度小于800bp的范围；4.不能检测低频突变；5.检测多个位点时操作繁琐、费用高。

技术领域

本发明涉及基因测序领域，具体涉及一种用于BRAF基因全外显子二代测序的多重PCR引物组合物、试剂及控制系统。

背景技术

BRAF（B-raf）基因编码是一种属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的蛋白质，是RAS/RAF/MEK/ ERK/ MAP信号传导通路中重要的转导因子，参与调控MAPKinse/ERK信号传导途径，从而影响诸如细胞生长、分化和凋亡等。研究表明，BRAF基因也是重要致癌基因之—，在多种人类恶性肿瘤中，如恶性黑色素瘤、结直肠癌（CRC）、非小细胞肺癌（NSCLC）、甲状腺癌、肝癌、胰腺癌以及毛细胞性白血病等，均检出不同比例的BRAF基因突变。

BRAF基因的转录本NM_001354609.1全长2342bp，有18个外显子，已知最常见的突变形式主要是外显子15上第1860位（编码序列的第1799位）及附近的不同形式的点突变，导致第600位缬氨酸V突变为其他种氨基酸（谷氨酸E、天冬氨酸D、赖氨酸K、甲硫氨酸M、丙氨酸A），对于其他位点的研究较少。

现有技术的BRAF基因突变检测多为针对BRAF基因的外显子15上第1860位点进行检测，存在以下局限性：

1.实时荧光定量PCR检测和基因芯片检测，不能检测未知位点；2.Sanger测序的检测位点局限在800bp以内；3.不能检测低频突变；4.涉及多个位点检测时，原有技术操作繁琐、费用高。

专利“一种基于下一代测序技术检测EGFR/KRAS/BRAF基因突变位点的多重PCR引物和方法及应用”，解决的是同时检测EGFR/KRAS /BRAF基因突变的问题，针对于BARF，仍然只检测了外显子15上第1860位（编码序列的第1799位）的突变。

发明内容

为解决现有技术的的BRAF基因突变检测多为针对BRAF基因的外显子15上第1860位点进行检测，存在多种局限性的技术问题，本发明提供一种解决上述问题的用于BRAF基因全外显子二代测序的多重PCR引物组合物、试剂及控制系统。

用于BRAF基因全外显子二代测序的多重PCR引物组合物包括SEQ ID NO：01~ SEQID NO：46所示的全部引物。

用于BRAF基因全外显子二代测序的试剂包括上述的多重PCR引物组合物以及二代测序所需试剂。

引物组合物在进行多重PCR扩增前，先将SEQ ID NO：01~ SEQ ID NO：06、SEQ IDNO：09~ SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：13~ SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：21~ SEQ ID NO：26、SEQID NO：33~ SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：39~ SEQ ID NO：40所示的引物记为A类；

将SEQ ID NO：07~ SEQ ID NO：08、SEQ ID NO：11~ SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：17~ SEQID NO：20、SEQ ID NO：27~ SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：37~ SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：41~SEQ ID NO：46所示的引物记为B类；