[发明专利]一种血浆中α1微球蛋白的提取方法

权利要求书

1.一种血浆中α1微球蛋白的提取方法，其特征在于，包含如下步骤：

1）取α1微球蛋白抗原免疫后的新鲜羊血浆，待血液凝固后，取血浆离心除去纤维蛋白原及某些凝血因子后分离出淡黄色透明液体-血清；

2）虹吸法吸出上层淡黄色透明液体，采用硫酸铵沉淀法使血清充分沉淀，离心分离沉淀，将沉淀复溶于缓冲液中，充分复溶后，进行透析，浓缩；

3）凝胶过滤层析；

4）Protein G亲和层析；

5)SDS-PAGE法鉴定α1微球蛋白纯度。

2.根据权利要求1所述的血浆中α1微球蛋白的提取方法，其特征在于：所述离心条件为4℃下，4000ｘg离心15min。

3.根据权利要求1所述的血浆中α1微球蛋白的提取方法，其特征在于：所述硫酸铵沉淀法沉淀至溶液硫酸铵终饱和浓度达到33%（w/v）使血清充分沉淀。

4.根据权利要求1所述的血浆中α1微球蛋白的提取方法，其特征在于：所述沉淀复溶缓冲液采用pH7.5的磷酸钾缓冲液，透析缓冲液采用生理盐水溶液，采用PEG20000浓缩蛋白。

5.根据权利要求1所述的血浆中α1微球蛋白的提取方法，其特征在于：所述步骤3）具体为：取装有sephadex G100填料的色谱柱，用pH7.5的磷酸钾缓冲液作为平衡缓冲液平衡所述色谱柱，上样，然后用相同缓冲液以0.5 mL/min洗脱，收集洗脱液，用聚乙二醇20000浓缩收集液。

6.根据权利要求1所述的血浆中α1微球蛋白的提取方法，其特征在于：所述步骤4）具体为：吸取Protein G亲和层析介质匀浆到一个预先装有1mL Binding Buffer的层析柱内，让填料填料自然沉降到柱子底部，加入5 mL Binding Buffer到柱中，让Buffer缓慢流出，流速为1mL/min；将步骤3）中的浓缩液用Binding Buffer 1:1稀释，开始加样，流速约为0.2-0.5 mL/min，收集流出液，后续用SDS-PAGE检测纯化效率；使用大约30 mL Binding Buffer洗涤，流速大约为2 mL/min，边洗涤边检测280nm处的吸光度，直至出现稳定值；洗涤完毕后，开始加入10-15 mL Elution Buffer，使用1 mL/min较低流速，收集洗脱液，再调节pH至7.4，即为纯的α1微球蛋白；其中Binding Buffer为：20Mm NaHPO4，0.15M NaCl，pH 8.0；Elution Buffer为：0.1 M甘氨酸 pH 2.5。