[发明专利]A82846B的发酵制备方法

权利要求书

1.一种发酵制备奥利万星中间体A82846B的方法，该方法包括：

(1)将东方拟无枝酸菌接种到种子培养基中进行培养，得到种子液；

(2)将种子液接种于发酵培养基中进行发酵培养；

(3)对发酵得到的发酵液进行提取，提取得到的A82846B纯度在90％以上部分用于提取产品，纯度在90％以下的则是杂质废液；

(4)将上述杂质废液进行酸降解，得到酸降解液；

(5)将步骤(4)得到的酸降解液加入到发酵培养基后，将步骤(1)得到的种子液接种于该发酵培养基进行发酵，发酵培养得到A82846B；其中，步骤(1)的东方拟无枝酸菌为东方拟无枝酸菌NRRL 18099；

步骤(1)的种子培养基为麦芽糊精20g/L，葡萄糖10g/L，黄豆粉15g/L，酵母提取物3g/L，碳酸钙1g/L，pH7.0；

步骤(2)和步骤(5)的发酵培养基为麦芽糊精40g/L，糖蜜20g/L，黄豆粉20g/L，酵母粉10g/L，碳酸钙3g/L，氯化钙10g/L，pH7.0；

步骤(3)提取的方法为：将步骤(2)得到的发酵培养液pH调节至10～11，固液分离得到滤液；将滤液pH调节至9.0-9.5后导入大孔吸附树脂进行富集；将树脂净化，然后用解吸液进行解吸并收集组分，得到A82846B解吸混合液；将解吸混合液进行浓缩后，进行反相填料层析分离，用极性溶剂与盐水的解吸混合液进行解吸，将层析分离得到的解析液，A82846B纯度在90％以上部分用于提取产品；

步骤(4)所述的酸降解是步骤(3)得到的杂质废液在pH不大于2.0的环境下进行水解的，取步骤(3)得到的杂质废液，50-60℃水浴，水浴5h后开始取样液相分析，当A82846A、A82846B和A82846C完全检测不到的时候，停止水浴，杂质降解液冷却后，调节pH至中性，得到的为酸降解液；

步骤(5)中以发酵体积计，加入1.5％～6％的酸降解液。

2.如权利要求1所述的方法，步骤(3)提取的方法为：将步骤(2)得到的发酵培养液pH调节至10.3，搅拌后进行板框压滤，得到压滤液，将压滤液调节pH＝9.2，将其导入LX18吸附树脂，树脂用水净化后，再用1.0％醋酸水溶液进行解吸，并将浓度大于500mg/L的组分混合，组成一次解吸混合液，然后将解吸混合液进行纳滤，浓缩至单位为35000mg/L，将浓缩液导入已平衡好的C18柱，用洗脱液进行洗脱，该洗脱液为按体积计5％乙腈:0.5％NH₄H₂PO₄＝3:97，收集纯度为90％以上的组分用于提取产品。

3.如权利要求1所述的方法，步骤(4)所述的酸降解是步骤(3)得到的杂质废液在pH为1.0-2.0的环境下进行水解的。

4.如权利要求3所述的方法，步骤(4)所述的酸降解为：取步骤(3)得到的杂质废液，调节pH至2.0。