[发明专利]A82846B的发酵制备方法

说明书

本发明公开了一种发酵制备A82846B的方法。该方法为将东方拟无枝酸菌进行发酵培养后得到的发酵培养液进行提取后，提取得到的杂质废液进行酸降解，得到酸降解液。将酸降解液加入到发酵培养基后，再次进行发酵，通过添加不同浓度的杂质酸降解液，A82846B发酵单位有了大幅提高，同时组分有了显著改善。

技术领域

本发明属于微生物发酵生产技术领域，涉及糖肽类抗生素的发酵方法，具体涉及一种通过发酵制备奥利万星中间体A82846B的方法。

背景技术

糖肽抗生素是由微生物产生，或由微生物产生并进行部分修饰的一大类物质。万古霉素和替考拉宁为市售的抗菌产品。在上世纪九十年代发现的糖肽中，包括称作A82846A（也称作ereomomycin）、A82846B（也称作氯东方霉素chloroorienticinA）、A82846C（也称作东方霉素orienticinC）及东方霉素A。已经对天然存在的糖肽进行了多种修饰，其中一种是对糖肽中的反应性胺的还原烷基化的修饰。

2014年8月7日FDA批准抗生素奥利万星(oritavancin)用于由敏感革兰氏阳性菌导致的急性细菌性皮肤和皮肤结构感染成人患者的治疗。奥利万星是一种单剂量治疗方案的抗生素,具有良好的市场前景。

A82846B是合成奥利万星的关键中间体，可由东方拟无枝酸菌(Amycolatopsisorientalis)发酵产生。除了A82846B，东方拟无枝酸菌发酵时还会产生两种主要成分A82846A和A82846C，其结构式如下：

A82846A分子式为C₇₃H₈₉N₁₀O₂₆Cl，A82846B分子式为C₇₃H₈₈N₁₀O₂₆Cl₂，A82846C分子式为C₇₃H₉₀N₁₀O₂₆。

由上可知，三种物质结构非常接近，分离纯化工作相当困难，生产成本因此而提高，发酵液中A82846B的组分比例（A82846B在三种物质中所占比例）的高低将极大影响提取收率。目前我国关于A82846B的研究较少，发酵单位和组分比例都较低，导致生产成本居高不下。

发明内容

本发明公开了一种发酵制备A82846B的新方法，通过优化A82846B发酵的工艺，不仅提高了发酵单位，而且也提高了A82846B的组分比例，提高了收率，降低了生产成本。

在发酵制备A82846B的整个过程中，发酵后的提取过程中会产生大量杂质废液，这些杂质废液中包含发酵过程中产生的大部分A82846A和A82846C，以及部分A82846B。本发明技术人员通过研究利用这些杂质废液，意外地发现这些杂质废液的降解产物中的某些成分可以作为A82846B合成的前体，有助于提高A82846B的发酵单位和组分比例，从而降低生产成本。

本发明发酵制备奥利万星中间体A82846B的方法为：

（1）将东方拟无枝酸菌接种到种子培养基中进行培养，得到种子液；

（2）将种子液接种于发酵培养基中进行发酵培养；

（3）对发酵得到的发酵液进行提取，提取得到的A82846B纯度在90%以上部分用于提取产品，纯度在90%以下的则是杂质废液；

（4）将上述杂质废液进行酸降解，得到酸降解液；

（5）将步骤（4）得到的酸降解液加入到发酵培养基后，将步骤（1）得到的种子液接种于该发酵培养基进行发酵，发酵培养得到A82846B。