[发明专利]青钱柳愈伤组织诱导及继代增殖培养基及其培养方法

权利要求书

1.青钱柳愈伤组织诱导及继代增殖培养基，其特征是，包括植物愈伤组织诱导培养基和继代增殖培养基；

植物愈伤组织诱导培养基配方分别为：

基本培养基WPM中添加6-BA0.2～0.8mg·L^-1、IBA0.05～0.1mg·L^-1、蔗糖25～35g·L^-1、琼脂粉7～7.2g·L^-1、抗褐化剂PVP 100～200mg·L^-1，并调节pH至5.78～5.82；

或改良MS基本培养基中添加6-BA1.0～1.5mg·L^-1、NAA0.05～0.1mg·L^-1、蔗糖30～35g·L^-1、琼脂粉6～6.3g·L^-1、抗褐化剂PVP100～200mg·L^-1，并调节pH至5.78～5.82；所述的改良MS基本培养基为3/4MS基本培养基；

植物愈伤组织继代增殖培养基配方分别为：

基本培养基WPM中添加6-BA0.5mg·L^-1、IBA 0.1mg·L^-1、蔗糖25～30g·L^-1、琼脂粉6.0～6.3g·L^-1、抗褐化剂PVP 100～200mg·L^-1，并调节pH至5.78～5.82；或基本培养基WPM中添加6-BA 1～1.5mg·L^-1、NAA0.05～0.1mg·L^-1、蔗糖25～30g·L^-1、琼脂粉6.0～6.3g·L^-1、抗褐化剂PVP 100～200mg·L^-1，并调节pH至5.78～5.82。

2.基于权利要求1所述的青钱柳愈伤组织诱导及继代增殖培养基的培养方法，其特征是，包括如下步骤：

(1)外植体的选择：取样时间为4月至9月，于温室培养的2～5年生植株上选取当年生青钱柳半木质化带芽茎段；

(2)外植体的灭菌：在酒精中浸泡青钱柳茎段，用无菌水冲洗2～3次后，放入次氯酸钠溶液中浸泡，用无菌水冲洗4～5次后备用；

(3)无菌抗褐化体系建立：将修剪好的茎段平放于灭菌的诱导培养基中，用封口膜密封后放入培养室培养，培养室光照时间为12h/天，光照强度为1500Lx，培养温度为21±2℃；

(4)增殖培养：待愈伤组织诱导培养40天后，切取淡黄色无褐变、质地疏松、生长旺盛的愈伤组织，将其移至继代增殖培养基中进行继代增殖培养，用封口膜密封后放入培养室培养，培养室光照时间为12h/天，光照强度为1500Lx，培养温度为21±2℃，每隔40～45d继代一次。

3.根据权利要求2所述的基于青钱柳愈伤组织诱导及继代增殖培养基的培养方法，其特征是，所述步骤(1)中，外植体选择的具体方法为：在晴好天气下，从2～5年生青钱柳植株上向阳面外围，选取当年生健康、无病害的营养枝，从顶端1、2节处剪取长度为3～4cm的半木质化带芽茎段，保留1个腋芽。

4.根据权利要求2所述的基于青钱柳愈伤组织诱导及继代增殖培养基的培养方法，其特征是，所述步骤(2)中，酒精浓度为75％，浸泡25～30s，次氯酸钠浓度为10％，浸泡3～4min。

5.根据权利要求2所述的基于青钱柳愈伤组织诱导及继代增殖培养基的培养方法，其特征是，所述步骤(2)中，外植体灭菌前，修剪茎段上的叶片，保留叶柄和1/5叶片，自来水冲洗1～2小时，转置超净工作台进行消毒处理。

6.根据权利要求2所述的基于青钱柳愈伤组织诱导及继代增殖培养基的培养方法，其特征是，所述步骤(3)中，将消毒好的青钱柳茎段平铺于已消毒的滤纸上晾干后再进行接种。