[发明专利]青钱柳愈伤组织诱导及继代增殖培养基及其培养方法

说明书

本发明公开了青钱柳愈伤组织诱导及继代增殖培养基，还公开了基于青钱柳愈伤组织诱导及继代增殖培养基的培养方法，包括外植体的选择、外植体的灭菌、无菌抗褐化体系建立和增殖培养。本发明能够有效提高青钱柳愈伤组织的抗褐化能力，在较短时间内获得大量无褐化、生长速度快的愈伤组织，通过生物技术手段解决青钱柳资源紧缺的问题，为后期工业化提取青钱柳三萜、黄酮、多糖等次生代谢产物奠定基础。

技术领域

本发明涉及一种青钱柳愈伤组织诱导及继代增殖培养基及其培养方法，属于植物组织培养技术领域。

背景技术

青钱柳[Cyclocarya paliurus(Batal.)Iljinskaja]属双子叶植物纲(Dicotyledoneae)胡桃科(Juglandaceae)青钱柳属(Cyclocarya)植物，是一种重要的药食同源植物，为我国特有的单种属植物(中国植物志，1979)，近年来，因其叶含有特有的三萜黄酮多糖物质，被证明具降血压(侯小利等，2014)、降血脂(Jiang et al，2015；Ma et al，2015)、降血糖(Yoshitomi et al，2017；黄维琳等，2017)、抗氧化(Wang et al，2015；Xieet al，2015)等生理功能，并具有改善肾功能、调节血糖紊乱、缓解肝脏损伤、提高免疫功能(Wang et al，2017)等生理作用而被广泛关注。青钱柳的药用成分主要从叶片中提取，但是，其天然资源分布零散，种源、个体间成分含量差异明显，因此为有效保护种质资源和实现次生代谢产物的工业化生产，通过组织培养技术，在组织细胞水平促进次生代谢物的生物合成是具有特殊的理论和现实意义。

愈伤组织培养技术具有增殖效率高、培养成本低、材料生长快等特点，不仅是植物间接快繁的重要步骤，也是植物种质资源保存、次生代谢产物生产的理想方法，具有较为广阔的应用前景。在间接快繁研究方面，胡杨(Populus euphratica)(Cai et al.,2015)、合欢(Albizia julibrissin)(Rahmani et al.,2016)、檀香(Santalum album)(Singh etal.,2016)等均通过愈伤脱分化再生植株建立快繁体系。在种质资源保存方面，荔枝(Litchi chinensis)(王梓清，2006)、柑橘(Citrus reticulata)(王子成，2003)、龙眼(Dimocarpus longan)(叶炜，2006)等均通过胚性愈伤组织进行离体保存研究。在次生代谢产物生产方面，一些重要的次生代谢产物如杜仲(Eucommia ulmoides)(房慧勇等，2014)中的木脂素类，雷公藤(Tripterygium wilfordii)(李琰等，2010)中的内酯醇，红景天(Rhodiola rosea)(邵春绘，2014)中的红景天苷，小叶毛果芸香(Pilocarpusmicrophyllus)(Abreu et al.,2005)中的毛果芸香碱，均是通过体外愈伤诱导培养获得的。综上所述，愈伤组织培养技术是一门具有潜在应用价值的技术，尤其在药用植物次生代谢产物生产方面具有重要价值。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷，提供一种青钱柳愈伤组织诱导及继代增殖培养基及其培养方法，该方法能够有效提高青钱柳愈伤组织的抗褐化能力，在较短时间内获得大量无褐化、生长速度快的愈伤组织，通过生物技术手段解决青钱柳资源紧缺的问题，为后期工业化提取青钱柳三萜、黄酮、多糖等次生代谢产物奠定基础。

为解决上述技术问题，本发明提供一种青钱柳愈伤组织诱导及继代增殖培养基，其特征是，包括植物愈伤组织诱导培养基和继代增殖培养基；

植物愈伤组织诱导培养基配方分别为：

基本培养基WPM中添加6-BA0.2～0.8mg·L^-1、IBA0.05～0.1mg·L^-1、蔗糖25～35g·L^-1、琼脂粉7～7.2g·L^-1、抗褐化剂PVP 100～200mg·L^-1，并调节pH至5.78～5.82；