[发明专利]一种基于Transwell孔板上室培养细胞下室吸附分离外泌体的方法和应用在审
| 申请号： | 201910262033.6 | 申请日： | 2019-04-02 |
| 公开（公告）号： | CN109929802A | 公开（公告）日： | 2019-06-25 |
| 发明（设计）人： | 殷义霞;邵锜;王文武;李宾斌;韩颖超;张明曦 | 申请（专利权）人： | 武汉理工大学 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775;C12N5/0797;C08J3/075;C08L5/08;C08L89/00 |
| 代理公司： | 北京志霖恒远知识产权代理事务所(普通合伙) 11435 | 代理人： | 朱昀 |
| 地址： | 430070 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 孔板 上室 下室 离心处理 培养细胞 吸附 分泌 细胞培养 水溶性聚合物溶液 应用 氨基 生物医学技术 渗透压作用 室内聚合物 完全培养基 分离效率 分子分析 去质子化 细胞转移 静电 体能力 小粒径 正离子 灭菌 混入 配制 孵化 穿过 细胞 | ||
1.一种基于Transwell孔板上室培养细胞下室吸附分离外泌体的方法，其特征在于：首先配制含有大量氨基正离子的水溶性聚合物溶液，灭菌后转移至Transwell孔板下室；然后将具有分泌外泌体能力的细胞转移至装有完全培养基的Transwell孔板上室，并在低氧条件下进行细胞培养；上室细胞孵化过程中在低氧刺激下分泌外泌体的同时由于静电作用和渗透压作用，外泌体穿过孔板被下室内聚合物牢牢抓住；细胞培养结束后，收集下室聚合物溶液进行第一低速离心处理，得到含有外泌体的聚合物溶液。
2.根据权利要求1所述的基于Transwell孔板上室培养细胞下室吸附分离外泌体的方法，其特征在于：所述方法还包括将所得含有外泌体的聚合物溶液依次进行去质子化、第二低速离心处理，最终收集得到纯化外泌体的步骤。
3.根据权利要求1所述的基于Transwell孔板上室培养细胞下室吸附分离外泌体的方法，其特征在于：所述Transwell孔板为Transwell-6孔板、Transwell-12孔板或Transwell-24孔板中的任意一种。
4.根据权利要求1所述的基于Transwell孔板上室培养细胞下室吸附分离外泌体的方法，其特征在于：所述的水溶性聚合物溶液为水溶性壳聚糖衍生物溶液、明胶溶液、氨基化透明质酸衍生物溶液、氨基化海藻酸钠衍生物溶液中的任意一种。
5.根据权利要求1所述的基于Transwell孔板上室培养细胞下室吸附分离外泌体的方法，其特征在于：所述水溶性聚合物溶液的质量百分比浓度为1～5 %。
6.根据权利要求1所述的基于Transwell孔板上室培养细胞下室吸附分离外泌体的方法，其特征在于：所述具有分泌外泌体能力的细胞为雪旺细胞、巨噬细胞、脂肪干细胞、神经干细胞、骨髓间充质干细胞、脐带间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、尿液来源干细胞、内皮祖细胞、或心脏干细胞中的任意一种。
7.根据权利要求1所述的基于Transwell孔板上室培养细胞下室吸附分离外泌体的方法，其特征在于：所述细胞在完全培养基中的接种浓度为0.5～2.0×105/mL。
8.根据权利要求1所述的基于Transwell孔板上室培养细胞下室吸附分离外泌体的方法，其特征在于：所述第一低速离心处理和第二低速离心处理的条件均为：离心转速500～1500rpm，离心时间5～10min。
9.权利要求1～8任一项所述方法分离得到的纯化外泌体在制备外泌体水凝胶中的应用。
10.一种温度响应型或光敏型外泌体水凝胶，其特征在于：包含权利要求1～8任一项所述方法分离得到的纯化外泌体。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于武汉理工大学，未经武汉理工大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201910262033.6/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
