[发明专利]一种靶向治疗肿瘤的重组融合蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种靶向治疗肿瘤的重组融合蛋白及其制备方法和应用，属于治疗肿瘤的重组融合蛋白技术领域。本发明中的重组融合蛋白是由穿膜肽、转铁蛋白N端结构域与重组豹蛙抗瘤酶融合而成的重组融合蛋白9R‑rONC‑TFn和9R‑TFn‑rONC，其对应的氨基酸序列分别如序列表中SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示。本发明所得重组融合蛋白存在稳定性高和半衰期长等优点，并且具有良好的肿瘤穿透能力和肿瘤靶向作用。

技术领域

本发明属于治疗肿瘤的重组融合蛋白技术领域，具体涉及一种靶向治疗肿瘤的重组融合蛋白及其制备方法和应用。

背景技术

肿瘤是一种多因素、多阶段和多基因变异累积的的复杂疾病，其死亡率在全球范围内高居榜首，虽然全世界每年用于肿瘤治疗的费用高达上万亿美元，但疗效高且特异性强的抗肿瘤药物仍然十分缺乏。一般的肿瘤治疗(化学药物治疗和放射治疗)对快速分裂生长的细胞发挥破坏和杀伤作用，对非肿瘤细胞(分裂期的正常细胞)的毒副作用大，而且长期化疗易产生抗药性，使治疗效果下降。生物制药技术的发展为开发靶向性强且疗效高的抗肿瘤药物提供了良好的发展前景，近年来通过配体-受体介导的主动靶向药物载体系统已经成为抗肿瘤治疗研究的热点(Cheung A,et al.Targeting folate receptor alphafor cancer treatment.Oncotarget,2016.7:52553-74.Marchetti C,et al.Targeteddrug delivery via folate receptors in recurrent ovarian cancer:a review.OncoTargets Ther,2014.7:1223-36)，部分肿瘤患者借助于药物靶向载体治疗的方法提升了生存质量和延长了生存期。抗肿瘤药物偶联载体进行药物的靶向输送作为一种研究方向将越来越受研究者们的青睐。

生理状态下，人体内存在于细胞膜上的受体可特异性地识别配体和抗体分子，并将其导入到体内特定的位置。将配体连接到药物载体表面后，可通过配体-受体介导这一途径将药物特异性地导入体内某一部位，从而实现主动靶向转运。肿瘤组织细胞膜上存在多种特异性受体，如转铁蛋白受体(Transferrin receptor,TFR)、低密度脂蛋白受体和叶酸受体等，有些受体已证实可作为特定肿瘤靶向治疗的靶点。近年来，转铁蛋白(Transferrin,TF)和TFR介导的药物传递系统也取得了令人振奋的结果(Wang X,etal.Targeted delivery of tumor suppressor microRNA-1by transferrin-conjugatedlipopolyplex nanoparticles to patient-derived glioblastoma stem cells.CurrPharm Biotechnol,2014.15:839-46.Lubgan D,Marczak A,Distel L,et al.Transferrinconjugates in the anticancer therapy.Postepy Biochem,2006.52:72-9)。利用TFR有效的靶向作用，TF与抗肿瘤药物的交联物既提高了药物的特异性结合能力，也增强了其治疗效果。TF是由肝脏合成的一种单链糖蛋白，其相对分子质量约75-77kD，体内半衰期约8天(Li H,et al.The role of the transferrin-transferrin-receptor system in drugdelivery and targeting.Trends Pharmacol Sci,2002.23:206-9.)。TF有两个相同的球形结构域，分别位于N-端和C-端，这两个结构域有一定的同源性(Andrés MT,etal.Antimicrobial mechanism of action of transferrins:selective inhibition ofH+-ATPase.Antimicrob Agents Chemother,2010.54:4335-42)。研究者们成功的在毕赤酵母中表达TF的N端结构域蛋白(TFn)，体外实验结果表明该蛋白可以结合并释放铁原子，进一步说明了体外表达的TFn仍具有生物学活性(Mason AB,et al.Production andisolation of the recombinant N-lobe of human serum transferrin from themethylotrophic yeast Pichia pastoris.Protein Expr Purif,1996.8:119-25)。