[发明专利]液质联用检测尿液中环磷酸腺苷的方法

说明书

本发明公开一种液质联用检测尿液中环磷酸腺苷的方法，包括以下步骤：(1)样本前处理：对尿液样本用阴离子交换固相萃取进行前处理，得到供试品溶液；(2)采用液质联用检测所述供试品溶液：色谱条件采用反相C18亲水色谱柱；采用梯度洗脱；质谱条件为：离子源为电喷雾离子源；离子模式为正离子模式；监测模式为多反应监测。本发明还公开液质联用检测尿液中环磷酸腺苷的内标定量检测方法。本发明的方法是首次建立了尿液样本中cAMP液相色谱串联质谱检测法，能够有效检出尿液样本中cAMP，具有分离效果好，基线平稳，检测时间短，线性好，准确度高，重现性好，灵敏度高，精密度高的特点。

技术领域

本发明涉及医学检测技术领域，具体涉及一种人尿液中环磷酸腺苷液相色谱串联质谱检测方法。

背景技术

环磷酸腺苷(cAMP)作为“第二信使”调控胞内酶或蛋白的活性以响应各类激素(如甲状旁腺激素)水平的变化。cAMP在正常细胞中含量较少，在激素作用下，可明显提高。大部分肽类激素，如胰高血糖素、甲状旁腺素、降钙素、抗利尿激素和催产素等可以通过相应受体激活靶细胞膜上的腺苷酸环化酶，从而使胞内cAMP的浓度增加。

目前，最常用的体液(血浆、尿液、脑脊液等)中cAMP检测方法主要有酶联免疫法(ELISA)。虽然ELISA应用较广泛，但是仍存在一些缺点，主要为操作过程有些繁琐，易出现假阳性结果，重复性待提高。液相色谱串联质谱法相对于ELISA具有更加简单、快速、准确的优点。目前，尿液中cAMP液相色谱串联质谱检测法尚未见报道。尿液中cAMP检测的特点之一在于样本量多，通常是应用于临床样本(尿液)的高通量筛查。因此，尿液中cAMP的检测对检测过程简单、耗时短、检测结果准确性高、可靠性强提出了更高的要求。

本方法除首次建立了尿液中cAMP液相色谱串联质谱检测法外，并且针对现有方法检测过程繁琐、时间长的缺点进行了改进和优化，以节省检测时间、同时保证了检测的准确性和可靠性，从而使之更加有利于临床样本(尿液)的高通量筛查。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于，提供一种环磷酸腺苷的液质联用检测方法，其具有操作简单、检测快、精密度和灵敏度高、重现性好的特点。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

一种液质联用检测尿液中环磷酸腺苷的方法，包括以下步骤：

(1)样本前处理：对尿液样本用阴离子交换固相萃取进行前处理，得到供试品溶液；

(2)采用液质联用检测所述供试品溶液：

其中，液相色谱条件为：色谱柱采用反相C18亲水色谱柱；流动相包括流动相A和流动相B；流动相A为0.005～100mM乙酸盐水溶液，所述乙酸盐选自乙酸铵、乙酸钾、乙酸钠中的一种或多种；流动相B为乙腈、或甲醇、或乙腈与甲醇的混合液；采用梯度洗脱，梯度洗脱程序为：0～1.00min，流动相B体积百分比维持在0％～20％；1.00～1.5min，流动相B体积百分比由0％～20％增至20％～90％；1.50～1.80min，流动相B体积百分比由20％～90％递增至90％～100％；1.80～1.81min，流动相B体积百分比由90％～100％递减至0％～20％；1.81～3.00min，流动相B保持体积百分比为0％～20％；

质谱条件为：离子源为电喷雾离子源；离子模式为正离子模式；监测模式为多反应监测。

具体的，所述步骤(1)中，所述尿液样本经上样、淋洗，然后用体积分数10-30％甲酸水溶液洗脱，收集的洗脱液用碱中和后，得到供试品溶液。

在一个优选的实施例中，固相萃取吸附剂类型为混合型强阴离子交换反相吸附剂。

在一个优选的实施例中，混合型强阴离子交换反相吸附剂的类型为96孔板。