[发明专利]嵌合抗原受体和其治疗肝癌的方法

权利要求书

1.分离的核酸，其包括编码嵌合抗原受体(CAR)的核苷酸序列和编码DAP10的核苷酸序列，所述CAR包含：(a)抗原结合结构域，其包括NKG2D的a.a.82-216片段，例如为SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列；(b)跨膜结构域和(c)胞内信号传导结构域。

2.权利要求1的核酸，其中编码所述跨膜结构域的核苷酸序列包括编码CD8和/或CD28的跨膜结构域，优选为CD28的跨膜结构域的核苷酸序列，例如为SEQ ID NO：7的核苷酸序列。

3.权利要求1的核酸，其中编码所述胞内信号传导结构域的核苷酸序列包括编码CD28，4-1BB和CD3ζ的胞内信号传导结构域中的一个或多个的核苷酸序列，优选包括编码CD28，4-1BB和CD3ζ的胞内信号传导结构域的核苷酸序列，更优选包括编码从氨基端到羧基端按顺序为CD28、4-1BB和CD3ζ的蛋白质的核酸序列；

其中，

例如，编码CD28的胞内信号传导结构域的核酸具有例如SEQ ID NO：9的核苷酸序列；

例如，编码4-1BB的胞内信号传导结构域具有例如SEQ ID NO：11的核苷酸序列；

例如，编码CD3ζ的胞内信号传导结构域具有例如SEQ ID NO：13的核苷酸序列；

最优选的，其中编码所述CAR的胞内信号传导结构域的核苷酸序列具有如SEQ ID NO：20的核苷酸序列。

4.权利要求1的核酸，其中还包括编码(a)抗原结构域和(b)跨膜结构域之间的铰链区的核苷酸序列，优选为编码IgGH1的核苷酸序列，其具有例如SEQ ID NO：5的核苷酸序列。

5.权利要求1的核酸，其中还包括编码位于所述NKG2D片段的上游的前导序列的核苷酸序列，优选为编码CD33的前导序列的核苷酸序列，例如为SEQ ID NO：17所示的核苷酸序列。

6.嵌合抗原受体(CAR)表达载体，其包含编码根据权利要求1-6中任一项的CAR的核酸，所述CAR包含：(a)抗原结合结构域，其包括a.a.82-216片段；(b)跨膜结构域和(c)胞内信号传导结构域。

优选的，其中包括编码位于所述NKG2D片段的上游的前导序列的核苷酸序列，所述前导序列的上游具有转录子，其可为Kozak片段，例如其序列为SEQ ID NO：16的核苷酸序列。

7.权利要求6的表达载体，其为病毒载体，例如杆状病毒表达载体，腺病毒载体，逆转录病毒载体，孢疹病毒载体或慢病毒载体，优选为慢病毒载体。

8.宿主细胞，其包含权利要求1-5的核酸或是权利要求6或7的表达载体，优选为T细胞，例如为CD4+T细胞或CD8+T细胞，更优选为由分离自受试者的T细胞衍生。

9.药物组合物，其含有权利要求1-5的核酸，或权利要求6或7的表达载体，或含有权利要求8的宿主细胞，其优选用于治疗或预防肝癌。

10.权利要求1-5的核酸，或权利要求6或7的表达载体，或含有权利要求8的宿主细胞在用于制备治疗或预防肝癌的药物中的用途。