[发明专利]一种辅助诊断疾病的检测试剂盒

说明书

本发明提供了一种辅助诊断疾病的检测试剂盒，所述试剂盒包括将VEGF抗体包被板制成固相抗体，往包被抗体的微孔中依次加入样品，再加入HRP标记的酶标液，形成抗体‑抗原‑酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色，TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在终止液作用下转化为黄色，颜色深浅与VEGF抗原含量成正相关，利用酶标仪测定450nm波长下OD，通过标曲计算VEGF含量。

技术领域

本发明涉及单克隆抗体领域，特别地涉及一种辅助诊断疾病的检测试剂盒。

背景技术

血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor，VEGF)，又称血管通透因子(Vascular permeability factor，VPF)是一种高度特异性的促血管内皮细胞生长因子，具有促进血管通透性增加、细胞外基质变性、血管内皮细胞迁移、增殖和血管形成等作用。

血管内皮生长因子家族有多种亚型，包括VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E和胎盘生长因子(PGF)，通常VEGF指VEGF-A。VEGF-A可促进新生血管形成和使血管通透性增加。

近日，研究表明血管内皮生长因子(VEGF)在调节正常及异常血管发生中具有关键作用(Ferrara等，Endocr.Rev.18:4-25(1997))，甚至VEGF序列单个等位基因的缺失会导致胚胎致死，表明VEGF在血管系统的发育和分化中具有不可代替的作用。一般肿瘤患者确诊时都到了中晚期，早期筛查并对可疑者或无症状患者及时诊断，可以提高肿瘤患者的生存率，延长生存时间。早发现和早治疗是肿瘤筛查的重要意义。VEGF在肿瘤细胞团向实体肿瘤转化过程中开始大量产生，此时多为肿瘤Tis期、T1期，是肿瘤筛查的最佳时期，并可通过现有的临床手段予以确诊。而其他肿瘤标记物多在肿瘤Ⅲ期、Ⅳ期产生，对早期筛查意义不大。

如此，需要开发在动物模型或患者的生物学样品中检测比现有ELISA更高的可测量水平的VEGF，和/或可以测量VEGF的不同同等型的诊断和预后测定法。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供一种特异性结合VEGF的单克隆抗体及用途及其用途

本发明是以如下技术方案实现的：

一种辅助诊断疾病的检测试剂盒，其特征在于，将VEGF抗体包被板制成固相抗体，往包被抗体的微孔中依次加入样品，再加入HRP标记的酶标液，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色，TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在终止液作用下转化为黄色，颜色深浅与VEGF抗原含量成正相关，利用酶标仪测定450nm波长下OD，通过标曲计算VEGF含量。

进一步地，所述检测试剂盒包含新型人源化VEGF单抗。

进一步地，所述VEGF抗体包括：

包含SEQ ID NO:01的氨基酸序列的CDR-L1，和/或

包含SEQ ID NO:02的氨基酸序列的CDR-L2，和/或

包含SEQ ID NO:03的氨基酸序列的CDR-L3，和/或

包含SEQ ID NO:04的氨基酸序列的CDR-H1，和/或

包含SEQ ID NO:05的氨基酸序列的CDR-H2，和/或

包含SEQ ID NO:06的氨基酸序列的CDR-H3。

进一步地，所述抗体为单克隆抗体，

可选地，所述抗体为特异性结合人VEGF的抗体片段，

可选地，所述抗体为包含特异性结合人VEGF抗体片段的融合蛋白，