[发明专利]一种具有高精密度的荧光免疫试纸条制备方法

权利要求书

1.一种具有高精密度的荧光免疫试纸条制备方法，其特征在于：包括以下步骤，

S1：预备用于进行免疫试纸条制备的PVC底板；

S2：制备用于与PVC底板相衔接于一体的样品垫；所述样品垫的制备步骤为：将样品垫置于样品垫处理液中浸泡30-120分钟，取出后置于37℃鼓风干燥箱中烘干至少10小时以上；

S3：制备用于与样品垫相衔接于一体的结合垫；所述结合垫的制备步骤为：在浸渍槽中，将50mL结合垫处理液浸渍一张200*300mm玻璃纤维素膜10min，送入鼓风干燥箱干燥，设置干燥温度37℃干燥时间为不少于10个小时；干燥处理后获得预处理结合垫；将裁切好预处理结合垫置于喷金仪上，用浓缩的荧光抗体偶联产物稀释到工作浓度配成工作液，气压0.2MPa，包被量3μL/cm，完毕后在37℃干燥温度下干燥时间不少于10小时；

S4：制备用于与结合垫相衔接于一体的NC膜；所述NC膜的制备步骤为：用事先配好的包被液分别将质控线和检测线的抗体、链霉亲和素或者生物素稀释到合适的浓度进行包被，检测线与NC膜的上端，质控线在NC膜的下端；最后将包被后的NC膜转入鼓风干燥箱干燥，干燥温度控制在37±1℃，干燥时间为不少于10个小时；

S5：将样品垫、结合垫、NC膜以及吸水纸依次与PVC底板进行衔接，制备得到最终的荧光免疫试纸条；

步骤S3中，浓缩的荧光抗体偶联产物的制备步骤为：

A1：荧光微球的初洗与活化：吸取1％浓度W/V荧光微球100μL，加1mL的初洗液并用超声清洗仪充分混匀，离心10min，用移液器吸弃上清，沉淀物用1mL的初洗液重悬并用超声清洗仪充分混匀，重复洗3次，最后一次洗涤后用1mL的初洗液重悬并用超声清洗仪充分混匀，确保微球呈单分散态；加入10mg/mLEDC 25μL、10mg/mL NHS 75μL活化30min；离心10min,用移液器吸弃上清，用1mL偶联液重悬；

A2：抗体、链霉亲和素或生物素的偶联：对于抗体或者链霉亲和素的偶联，其步骤为，在1mL偶联液重悬好的微球溶液中，超声混匀，离心10min,弃上清，重复3次，加入400μL偶联液重悬，按浓度加入抗体或者链霉亲和素旋涡混匀5h，对于生物素的偶联，其步骤为，在1mL偶联液重悬好的微球溶液中，超声混匀，离心10min,弃上清，重复3次，然后加入400μL偶联液重悬，按浓度加入牛血清白蛋白(BSA)旋涡混匀5h，然后用1×PBS离心，15000rpm，10min，洗涤3次，然后分散在1mL 1×PB中，再加入0.1mg/mL的NHS-biotin，继续反应2h；

A3：封闭：偶联完成后加入乙醇胺3μL，加入封闭液800μL，旋转混匀仪封闭2h；

A4：终洗：封闭完成后，离心10min，去掉上清；用1mL终洗液重悬，超声混匀，离心10min，用移液器尽量吸弃上清，重复3次；沉淀溶于100μL终洗液中，即为浓缩的荧光标记抗体；

所述荧光免疫试纸所对应的应用方式为：

B1：试剂测试前，用样本缓冲液按一定倍数稀释要测试的样本；

B2：测试时，去除荧光免疫试纸的外包装，取出荧光免疫试纸，按水平放置，精确吸取稀释后的样本75μL，加入到荧光免疫试纸的加样孔中，同时开始计时；

B3：待室温反应10min后，将荧光免疫试纸放入到仪器的卡槽中；点击对应检测仪器屏幕上的检测按键，仪器开始检测，并显示检测结果；

B4：点击打印，可打印出之前所检测的结果。