[发明专利]一种具有高精密度的荧光免疫试纸条制备方法

说明书

本发明首次将生物素‑链霉亲和素体系做为质控线引入免疫层析体系，提供一种具有高精密度的免疫荧光试纸条制备方法，包括以下步骤S1：预备用于进行免疫试纸条制备的PVC底板；S2：制备用于与PVC底板相衔接于一体的样品垫；所述样品垫的制备步骤为：将样品垫置于样品垫处理液中浸泡约30‑120分钟，取出后置于37℃鼓风干燥箱中烘干至少10小时以上；S3：制备用于与样品垫相衔接于一体的结合垫；所述结合垫的制备步骤为：在浸渍槽中，将50mL结合垫处理液浸渍一张200*300mm玻璃纤维素膜10min，送入鼓风干燥箱干燥，实际应用过程中，不仅可以制备得到高精密度的荧光免疫试纸，且能作为解决目前免疫荧光法灵敏度和精密度较低问题的解决方法。

[技术领域]

本发明涉及荧光免疫试纸条制备方法技术领域，尤其涉及一种稳定性和重现性优良的具有高精密度的荧光免疫试纸条制备方法。

[背景技术]

免疫层析技术是20世纪末发展起来的结合免疫技术和色谱层析技术的一种分析方法，该方法结合了标记示踪技术的高度灵敏性、抗原抗体反应的高度特异性以及层析技术的简易快速性，省去了繁琐的加样、洗涤步骤，因而操作简单，短时间内便可得到检测结果等特点，广泛应用于临床诊断、环境监测、食品安全等重要领域。而当前免疫层析技术以胶体金免疫层析应用的范围最为广泛，它通过条带显色对目标物定性检测或半定量分析。该方法虽然简单快速，但精密度较差，难以准确定量。因此如何提高检测试剂的精密度成为当前免疫层析方法的迫切问题。

生物素(Biotin)发现于20世纪60年代初，由咪唑酮环和噻吩环及其侧链构成。链霉亲和素是目前实验室中最常用的一类亲和素，稳定性强，其通过结构中的色氨酸残基与生物素中的咪唑酮环反应结合，二者以1：4的比例共价结合，其解离常数为10-15mol/L，是抗原抗体结合能力的100万倍，且不受酸、碱、变性计、高温、蛋白溶解酶和有机溶剂的干扰，并且生物素和亲和素容易获取，所以在实验研究和临床中具有广泛的应用前景。

目前已有大量的文献证明荧光免疫层析技术具有特异性强、简便快速、无需特殊昂贵仪器等优点，并且早在2013年就有相关专利CN104237517A公开了一种检测有关蛋白的荧光免疫层析试纸条，但仍存在精密度较低的问题，而生物素-链霉亲和素体系具有以下优点：①生物素和链霉亲和素是以1：4的比例结合，具有逐级放大效应，可以极大的提高其灵敏度，这也是生物素-链霉亲和素体系在免疫层析中最突出的优点。②生物素和链霉亲和素的特异结合能力强，是抗原抗体的100万倍，其反应高度专一，不会受反应试剂浓度高低的影响，因此该组合应用在免疫荧光层析中具有良好的稳定性和重现性。③该体系的应用范围广，适用于所有的抗原抗体的检测。因此，将生物素-链霉亲和素体系应用到此方法上能够大大的改善目前荧光免疫技术存在的问题。

而在2016年也有相关的专利CN105652008A公开了生物素-链霉亲和素体系应用于荧光免疫层析试纸条来检测脂蛋白相关磷脂酶A2，它能够提高其灵敏度和精密度的问题，说明该体系应用在荧光免疫层析试纸条是可行的，但该专利是把该体系用在检测线上，并且有两条标记垫，而本发明仅用一条结合垫，并且把该体系应用于质控线的检测，以保证质控线的稳定又不干扰目标抗原的检测(检测线的值)，并且操作简便，但目前为止还没有这方面相关的专利。

[发明内容]

为克服现有技术所存在的问题，本发明提供一种稳定性和重现性优良的具有高精密度的荧光免疫试纸条制备方法。

本发明解决技术问题的方案是提供一种具有高精密度的荧光免疫试纸条制备方法，包括以下步骤，

S1：预备用于进行免疫试纸条制备的PVC底板；

S2：制备用于与PVC底板相衔接于一体的样品垫；所述样品垫的制备步骤为：将样品垫置于样品垫处理液中浸泡约30-120分钟，取出后置于37℃鼓风干燥箱中烘干至少10小时以上；