[发明专利]一种产胆固醇氧化酶菌株的筛选方法在审
| 申请号： | 201910271075.6 | 申请日： | 2019-04-04 |
| 公开（公告）号： | CN110066849A | 公开（公告）日： | 2019-07-30 |
| 发明（设计）人： | 迟乃玉;希伦;张庆芳;刘洋;于爽 | 申请（专利权）人： | 大连大学 |
| 主分类号： | C12Q1/26 | 分类号： | C12Q1/26;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 大连八方知识产权代理有限公司 21226 | 代理人： | 朱秀芬 |
| 地址： | 116622 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 菌株 胆固醇氧化酶 筛选 初筛 发酵培养基 获得高产 酶活测定 唯一碳源 细菌筛选 蓝紫色 灵敏度 无菌水 胆固醇 稀释 复筛 富集 活化 接种 保证 | ||
1.一种产胆固醇氧化酶菌株的筛选方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)初筛：将深海海泥样品用无菌水稀释后，经过富集，再涂布于以胆固醇为唯一碳源的筛选平板上，挑选能够产生蓝紫色的菌株；
(2)复筛：将上述初筛菌株经活化后接种到发酵培养基中，20-30℃培养48h测定胞外胆固醇氧化酶活性。
2.如权利要求1所述的一种产胆固醇氧化酶菌株的筛选方法，其特征在于，所述方法步骤(1)中初筛过程的筛选固体培养基成分如下：胆固醇1.5466g/L，酵母膏0.5-10g/L，氯化钠2-10g/L，磷酸二氢钾1-10g/L，磷酸氢二钾0.5-10g/L，硫酸镁0.5-10g/L，淀粉10-20g/L，碘化钾1-10g/L，琼脂20-40g/L。
3.如权利要求1所述的一种产胆固醇氧化酶菌株的筛选方法，其特征在于，所述方法步骤(2)中复筛过程的发酵培养基成分如下：葡萄糖10g/L，胰蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L，胆固醇2g/L，Tween-80 1ml/L，pH6.5。
4.如权利要求1所述的一种产胆固醇氧化酶菌株的筛选方法，其特征在于，所述方法步骤(2)中酶活测定过程的测定体系成分如下：2,2-联氮(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐与HRP混合液3mL，胆固醇工作液200μL，粗酶液50μL；其中，ABTS-HRP混合液配置为：称取0.0183g ABTS和0.0021g HRP(250U/mg)，用0.05M磷酸钾缓冲液(pH7.2)溶解，定容至100ml；胆固醇工作液配制为：称取0.0190g胆固醇粉末溶解于脱氧胆酸钠(5％w/v)，定容至10ml。
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