[发明专利]一种新型的单碱基编辑技术及其应用在审
| 申请号： | 201910272959.3 | 申请日： | 2019-04-04 |
| 公开（公告）号： | CN111778233A | 公开（公告）日： | 2020-10-16 |
| 发明（设计）人： | 杨辉;周昌阳 | 申请（专利权）人： | 中国科学院脑科学与智能技术卓越创新中心 |
| 主分类号： | C12N9/78 | 分类号： | C12N9/78;C12N15/55;C12N15/85;C12N5/10 |
| 代理公司： | 上海一平知识产权代理有限公司 31266 | 代理人： | 徐迅;崔佳佳 |
| 地址： | 200031 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 新型 碱基 编辑 技术 及其 应用 | ||
1.一种腺嘌呤脱氨酶TadA的突变蛋白，其特征在于，所述的突变蛋白为非天然蛋白，并且所述突变蛋白在腺嘌呤脱氨酶TadA的选自下组的一个或多个氨基酸发生突变：
第147位苯丙氨酸(F)和第148位苯丙氨酸(F)；
其中，所述第147位和第148位是对应于如SEQ ID NO:1所示的序列的第147位和第148位。
2.如权利要求1所述的突变蛋白，其特征在于，所述突变蛋白具有催化腺嘌呤水解脱氨基生成次黄嘌呤的活性。
3.如权利要求1所述的突变蛋白，其特征在于，所述的腺嘌呤脱氨酶TadA包括TadA*酶和野生型TadA酶。
4.一种基因编辑酶，其特征在于，所述基因编辑酶的结构如式I所示：
Z1-L1-Z2-L2-Z3-L3-Z4 (I)
其中，
Z1为腺嘌呤脱氨酶TadA的氨基酸序列；
Z2为TadA*酶的氨基酸序列；
并且所述Z1和/或Z2为如权利要求1所述的突变蛋白的氨基酸序列；
Z3为Cas9核酸酶的编码序列；
L1、L2和L3各自独立地为任选的连接肽序列；
Z4为无或核定位信号元件(NLS)；
并且各“-”独立地为肽键。
5.如权利要求4所述的基因编辑梅，其特征在于，所述基因编辑酶的氨基酸序列如SEQID NO:10所示。
6.一种多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸编码如权利要求4所述的基因编辑酶。
7.一种载体，其特征在于，所述的载体含有如权利要求6所述的多核苷酸。
8.一种宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞含有如权利要求7所述的载体，或其基因组中整合有如权利要求6所述的多核苷酸。
9.一种基因单碱基定点编辑的方法，其特征在于，包括步骤：
(i)提供一细胞以及第一载体和第二载体，其中所述第一载体含有如权利要求2所述的基因编辑酶的表达盒，并且所述第二载体含有表达sgRNA的表达盒；
(ii)用所述的第一载体和第二载体感染所述的细胞，从而在所述细胞内进行单碱基定点编辑。
10.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：
(a1)第一容器，以及位于所述第一容器中的第一载体，所述所述第一载体含有如权利要求2所述的基因编辑酶的表达盒。
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