[发明专利]一种柑橘遗传背景鉴定用PCR引物、试剂盒及鉴定方法

说明书

本发明涉及一种柑橘遗传背景鉴定用PCR引物，引物的核酸序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示，另外本发明还提供了一种包含上述柑橘遗传背景鉴定用PCR引物的试剂盒及柑橘遗传背景的鉴定方法。本发明提供的柑橘遗传背景鉴定用PCR引物特异性高，扩增效率好，仅需一对引物即可快速鉴定柑橘的遗传背景，成本低，省时省力。

技术领域

本发明涉及分子生物技术领域，具体涉及一种柑橘遗传背景鉴定用PCR引物、试剂盒及鉴定方法。

背景技术

柑橘类水果是世界上产量最大的水果。柑橘可跨种属杂交，种属间杂种多，遗传背景复杂，目前还有很多未知的柑橘变种亟待鉴定。采用简便的技术方法弄清柑橘的遗传背景，可以为砧木资源的挖掘提供思路，加快人工杂交品种的选育进程。尽管柑橘可根据枝叶形态等鉴别其属种，但是柑橘的形态学标记较少，种间差异不明显。随着分子生物学的发展，DNA分子标记鉴定因快速准确、不受环境影响等优点逐渐发挥重要作用。在柑橘的研究中，越来越多的分子标记被开发，但是多数鉴定需要几对甚至十几对引物才能确定，而利用一对引物鉴别柑橘遗传背景的方法鲜有报道。

发明内容

本发明为解决上述问题提供一种柑橘遗传背景鉴定用PCR引物、试剂盒及鉴定方法。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种柑橘遗传背景鉴定用PCR引物，包括上游引物Citrus-F和下游引物Citrus-R，其序列分别如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示。

其中SEQ ID NO:1的序列为TGCTCTAGTATGCCAATCTGTGTCA。

SEQ ID NO:2的序列为TGATCACTGAGCAGTTTATGGGG。

本发明还提供了一种柑橘遗传背景鉴定用试剂盒，包括上述柑橘遗传背景鉴定用PCR引物。

进一步，所述试剂盒还包括TaqDNA聚合酶、buffer缓冲液和dNTP。

本发明还提供了一种柑橘遗传背景鉴定方法，使用上述试剂盒，方法为，提取柑橘待测样品的DNA，用所述柑橘遗传背景鉴定用PCR引物进行PCR扩增，然后采用琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物。当扩增产物中出现一条扩增条带时，若条带大小为1.8K判定为具有柚的遗传背景；若条带大小为1.4K判定为具有橘的遗传背景；若条带大小为1K判定为具有原始柑橘的遗传类型；当扩增产物中出现两条扩增条带时，根据孟德尔遗传规律进行判定。

进一步，所述原始柑橘包括枳、莽山野柑、枸橼、宜昌橙。

进一步，所述待测样品为待测柑橘的叶片。

进一步，PCR扩增的反应程序为：95℃预变性3分钟，95℃变性15秒，56℃复性15秒，72℃延伸2分钟，共35个循环，最后72℃延伸5分钟。

本发明的有益效果是：本发明提供的柑橘遗传背景鉴定用PCR引物特异性高，扩增效率好，仅需一对引物即可快速鉴定柑橘的遗传背景，成本低，省时省力。本发明能对未知柑橘和已知柑橘品种进行鉴定，对柑橘资源的挖掘和保护有重要意义。

附图说明

图1为本发明实施例1不同柑橘种PCR扩增凝胶电泳结果图；

图2为本发明实施例2中A、B、C、D的PCR扩增凝胶电泳结果图；

具体实施方式

以下结合附图及具体实施例对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。

本发明的供试材料采自华中农业大学脱毒楼、丹江口砧木繁育基地和陕西城固县斗山柑橘专业合作社。

实施例1