[发明专利]一种基于酶催化碘化钾氧化显色检测过氧化氢含量的分光光度法

权利要求书

1.一种基于酶催化碘化钾氧化显色检测过氧化氢含量的分光光度法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)建立标准曲线及其线性回归方程：将过氧化氢酶溶液和碘化钾溶液加入到缓冲溶液中得第一混合溶液，然后测定第一混合溶液在特定吸收波长处的吸光度值，并校零；分别向上述第一混合溶液中加入不同浓度的过氧化氢标准样形成第二混合溶液，使过氧化氢在第二混合溶液中形成0-100μmol L^-1的浓度梯度；将第二混合溶液于4-36℃进行氧化显色反应8-45s后，测定第二混合溶液在上述特定吸收波长处的吸光度值，记为a；以a作为横坐标，以过氧化氢在第二混合溶液中的最终浓度作为纵坐标，建立标准曲线及其线性回归方程；其中，过氧化氢酶溶液的活度为400-1600units L^-1，碘化钾溶液的浓度为20-60mmol L^-1，缓冲溶液的pH值为4.0-7.0，且上述过氧化氢酶溶液、碘化钾溶液与缓冲溶液的体积比为0.002-0.06∶0.02-0.44∶1；

(2)测定待测样品中过氧化氢含量：向上述第一混合溶液中加入待测样品形成第三混合溶液，于4-36℃进行氧化显色反应8-45s后，测定显色后第三混合溶液在上述特定吸收波长处的吸光度值，记为b；将b代入到步骤(1)中所得标准曲线的线性回归方程中，再通过待测过氧化氢样品与第三混合溶液的体积关系计算得出待测的过氧化氢样品中过氧化氢的含量；

上述特定吸收波长为350nm或400nm。

2.如权利要求1所述的分光光度法，其特征在于：所述缓冲溶液为醋酸缓冲溶液、磷酸缓冲溶液或硼酸缓冲溶液。

3.如权利要求1所述的分光光度法，其特征在于：所述浓度梯度为0μmol L^-1、5μmol L^-1、10μmol L^-1、20μmol L^-1、30μmol L^-1、40μmol L^-1、50μmol L^-1、60μmol L^-1及70μmol L^-1。

4.如权利要求1所述的分光光度法，其特征在于：所述第三混合溶液中，所述待测样品与缓冲溶液的体积比为0.04-0.97∶1。

5.如权利要求1所述的分光光度法，其特征在于：所述步骤(1)中，过氧化氢酶溶液、碘化钾溶液与缓冲溶液的体积比为0.002-0.05∶0.02-0.42∶1。

6.如权利要求1所述分光光度法，其特征在于：所述氧化显色反应的温度为5-35℃。

7.如权利要求1所述分光光度法，其特征在于：所用比色皿材质为石英，且比色皿长度为1cm、2cm、3cm、5cm或10cm。