[发明专利]一种生物突变体库的构建方法

权利要求书

1.一种生物突变体库的构建方法，其特征在于：所述方法为X1)或X2)：

所述方法X1)包括下述X11)和X12)：

X11)向靶标生物中导入DNA片段，得到转基因生物；所述DNA片段能在所述转基因生物中表达完成定点突变靶标DNA的所需的元件；

X12)培养所述转基因生物，得到生物突变体库；

所述方法X2)包括下述X21)和X22)：

X21)向靶标生物中导入DNA片段，得到转基因生物；所述DNA片段能在所述转基因生物中表达完成定点突变靶标DNA的所需的元件；

X22)培养所述转基因生物，从所述转基因生物中选择所述靶标DNA发生突变的个体得到生物突变体库，从所述转基因生物中选择含有所述DNA片段且所述靶标DNA未发生突变的个体进行繁殖，以扩大所述突变体库。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述生物为有性生殖生物或无性生殖生物。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述生物为有性生殖生物，所述转基因生物能特异在生殖细胞中定点突变所述靶标DNA。

4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：所述元件中至少有一个由生殖细胞特异启动子启动表达。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述生殖细胞特异启动子为卵细胞特异启动子、花粉细胞特异启动子或减数分裂特异启动子。

6.根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：所述元件为CRISPR/Cas方法或CRISPR/Cpf1方法中所需的元件。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述CRISPR/Cas方法或CRISPR/Cpf1方法中所需的元件均包括a1)或a2)：

a1)DNA内切酶和sgRNA；

a2)所述DNA内切酶、crRNA和tracrRNA。

8.根据权利要求1-7中任一所述的方法，其特征在于：所述DNA片段含有b1)或b2)：

b1)能表达所述DNA内切酶的表达盒和能表达所述sgRNA的表达盒；

b2)能表达所述DNA内切酶的表达盒、能表达所述crRNA的表达盒和能表达所述tracrRNA的表达盒；

进一步，所述DNA片段还能表达能用于筛选转基因生物的筛选标记。

9.根据权利要求1-8任一所述的方法，其特征在于：所述靶标DNA为与生物逆境、非生物逆境、产量性状、品质性状或次生代谢物相关DNA。

10.权利要求1-9中任一所述方法在筛选抗生物逆境、抗非生物逆境、高产量、好品质或高次生代谢物突变体中的应用。