[发明专利]一种试剂盒

权利要求书

1.TMAO在制备房颤导管消融术后复发的评估试剂盒中的应用，其特征在于所述试剂盒包括以下组分：乙腈、乙酸铵、TMAO标准品、d9-TMAO；所述乙腈和乙酸铵的规格是色谱纯；所述TMAO标准品的纯度是≥99%；所述d9-TMAO的纯度是≥98%。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂盒用于检测TMAO的高效液相色谱串联质谱。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于试剂盒的使用方法为：

A、标准品的配置：母液：超纯水配置1mg/ml的标准TMAO储备液，-20℃冰箱储存备用，除蛋白液：超纯水配置0.7mg/ml的d9-TMAO内标准溶液，并用乙腈稀释500倍，-20℃冰箱储存备用；

B、标准曲线的配置：检测前将TMAO母液逐级稀释，配置成不同浓度的标准溶液，浓度分别为：50、125、250、500、1250、2500、5000ng/mL，加入A中的除蛋白液，漩涡震荡1min，在4℃，13000rpm离心15min，取上清液进样检测，绘制以进样浓度为横坐标, 峰面积为纵坐标绘制标准曲线；

C、血浆样本的处理：取20μL血浆样本，加入80μL上述A中的除蛋白液放入离心管中，震荡1min充分混合均匀，4℃，13000rpm离心15min，取上清转移至进样瓶，准备上机检测；

D、色谱条件的调节：使用150*2.1mm，1.7μm的亲水色谱柱；流动相A： 5mmol/L乙酸铵；流动相B：乙腈，采用梯度程序洗脱，梯度条件：0-5min，50%A；5-10min，50%A-80%，10-15min，80%A，运行总时间15min；流速：0.3mL/min；进样量：3μL；柱温：30℃；

E、质谱条件的调节：离子源：电喷雾离子源，正离子模式；高纯氮气作为干燥气，氮气的纯度为99.999%；干燥气温度325C，干燥气流速10L/min；扫描方式：多反应监测模式，定量离子对：TMAOm/z76→58，d9-TMAOm/z85→66；定性离子：TMAOm/z42，d9-TMAOm/z46；碰撞能量：TMAO20eV，d9-TMAO25eV；

F、TMAO检测：以d9-TMAO作为同位素内标进行定量，通过流动A、B相，得到质谱图，峰面积经计算机转化为色谱数据得到待测血浆样本TMAO浓度。