[发明专利]一种紫花苜蓿的遗传转化方法

权利要求书

1.一种紫花苜蓿遗传转化方法，所述方法包括如下步骤：

1)将外源DNA分子转染紫花苜蓿含有茎尖的组织，培养，得到侵染后外植体；

2)将所述侵染后外植体在含有筛选剂的丛生芽诱导培养基中诱导培养，得到具有丛生芽外植体；

3)将所述具有丛生芽外植体在抗性芽伸长培养基中伸长培养，得到具有抗性芽外植体；

4)将所述具有抗性芽外植体在生根培养基中生根培养，得到再生紫花苜蓿植株，实现紫花苜蓿遗传转化；

所述含有筛选剂的丛生芽诱导培养基由MSB液体基本培养基、25g/L蔗糖、1.5mg/L 6-苄氨基嘌呤、0.4mg/L筛选剂、250mg/L抑菌剂和6.5g/L凝固剂组成；

所述抗性芽伸长培养基由MSB液体基本培养基、25g/L蔗糖、0.1mg/L吲哚乙酸、0.5mg/L赤霉素、0.4mg/L筛选剂、250mg/L抑菌剂和6.5g/L凝固剂组成；

所述生根培养基由MSB液体基本培养基、15g/L蔗糖、0.5mg/L吲哚乙酸、0.4mg/L筛选剂、150mg/L抑菌剂和6.5g/L凝固剂组成；

所述紫花苜蓿含有茎尖的组织为带有顶端分生组织的苜蓿外植体；

所述带有顶端分生组织的苜蓿外植体由一片子叶和苜蓿茎尖组成；

所述筛选剂为草丁膦；

所述抑菌剂为特美汀。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述凝固剂为琼脂糖；

所述各个培养基的pH值均为5.7-5.9。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

步骤1)中，所述转染时间为1h；所述培养为暗培养4天，培养温度为24-26℃；

步骤2)中，所述诱导培养的条件为24-26℃、湿度为50-70％、光照强度为1500-2000Lux、每天光照时间是16小时，黑暗时间为8小时，培养15-22d；

步骤3)中，所述伸长培养的条件为24-26℃、湿度为50-70％、光照强度为1500-2000Lux、每天光照时间是16小时，黑暗时间为8小时；

步骤4)中，所述具有抗性芽外植体在生根培养基中生根培养开始时间为待具有抗性芽外植体的芽伸长到4-5cm时；

所述生根培养的条件为24-26℃、湿度为50-70％、光照强度为1500-2000Lux，培养15-20d。

4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：所述紫花苜蓿品种为陇东苜蓿或金皇后苜蓿。