[发明专利]海鲈虹彩病毒的检测方法与试剂盒

权利要求书

1.一种海鲈虹彩病毒的CPA检测试剂盒，其特征在于，包含有检测引物：LMIV-F3，核苷酸序列为SEQ ID NO.1；LMIV-B3，核苷酸序列为SEQ ID NO.2；LMIV-B2，核苷酸序列为SEQID NO.3；LMIV-B1，核苷酸序列为SEQ ID NO.4；LMIV-CPF，核苷酸序列为SEQ ID NO.5。

2.根据权利要求1所述的CPA检测试剂盒，其特征在于，所述LMIV-B2的5’端和所述的LMIV-B1的5’端分别标记有荧光基团；LMIV-B2的5’端标记的荧光基团与LMIV-B1的5’端标记的荧光基团不同。

3.根据权利要求1或2所述的CPA检测试剂盒，其特征在于，还包括：缓冲液、甜菜碱、Mg²⁺溶液和DNA聚合酶中的至少一种。

4.一种非诊断目的的海鲈虹彩病毒的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)以待测样品为模板，以如权利要求1～3任一项所述的检测引物，进行CPA扩增：所述CPA扩增体系中，检测引物的浓度比，以μmol/L计，LMIV-F3：LMIV-B3：LMIV-B2：LMIV-B1：LMIV-CPF为0.4：0.4：(0.6～0.8)：(0.8～1.0)：1；

(2)检测扩增产物。

5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)以待测样品为模板，以如权利要求1～3任一项所述的检测引物，进行CPA扩增：所述CPA扩增体系中，检测引物的浓度比，以μmol/L计，LMIV-F3：LMIV-B3：LMIV-B2：LMIV-B1：LMIV-CPF为0.4:0.4：(0.6～0.8)：(0.8～1.0)：1，DNA聚合酶的浓度为0.256U/μL～0.384U/μL，Mg²⁺浓度为4mM/L～8mM/L，甜菜碱浓度为0.4mol/L～0.6mol/L，dNTPs浓度为0.6mM/L～0.7mM/L；扩增条件为57℃～60℃下扩增30～60min；

(2)检测扩增产物。

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述检测引物的浓度比，以μmol/L计，LMIV-F3：LMIV-B3：LMIV-B2：LMIV-B1：LMIV-CPF为0.4:0.4:0.8:0.8:1。

7.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述DNA聚合酶的浓度为0.256U/μL；和/或

所述Mg²⁺浓度为6mM/L；和/或

所述甜菜碱浓度为0.4mol/L；和/或

所述dNTPs浓度为0.6mM/L。

8.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述CPA扩增的扩增条件为58℃下扩增45min。

9.根据权利要求4～8任一项所述的检测方法，步骤(2)所述的检测扩增产物的方法为琼脂糖凝胶电泳法和/或核酸试纸条法。

10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，所述检测扩增产物的结果判定包括以下至少一种：

(1)取扩增产物，琼脂糖凝胶电泳后，置于紫外灯或凝胶成像系统中观察，观察到CPA特征性梯状条带，则结果为阳性；无任何条带，则结果为阴性；

(2)取扩增产物，用核酸试纸条检测，观察到只有一条质控线，则结果为阴性；同时观察到质控线和检测线，则结果为阳性；未观察到质控线，则检测结果无效。