[发明专利]海鲈虹彩病毒的检测方法与试剂盒

说明书

本发明的一种海鲈虹彩病毒的检测方法和试剂盒，通过引物自身的序列结构设计和引物间浓度比例的合理设置，同时结合对反应体系中的Mg²⁺浓度、dNTPs浓度、DNA聚合酶浓度、反应温度和时间的合理设置以及从以上各因素整体角度的合理配合，实现了海鲈虹彩病毒CPA检测特异性和灵敏度。最低检测限度可达到10²copies/μL，检测灵敏度较常规PCR高约10倍，且不与其他常见的水生病毒及水生常见细菌发生交叉反应，在待测样品的快速筛选检测方面具有明显优势。

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种海鲈虹彩病毒的检测方法与试剂盒。

背景技术

海鲈(Lateolabrax maculatus)亦称鮨。鲈形目(Perciformes)鮨科(Serranidae)，别名花鲈,是一种海产名贵经济鱼类。体长椭圆形而侧扁，略成纺锤形，头中等大，尖吻，口大，上下须有绒毛状牙群。背部稍隆起，其鳞为栉鳞，鳞较大，体色银白，背部呈是灰色，近似正方形。海鲈生性凶猛，以鱼、虾为食，耐低温、最适生长水温为16℃～27℃，最适生长盐度为16‰～17‰，是一种广盐性浅海岸中下层肉食鱼类。海鲈鱼在海洋中的分布比较广，亚洲的日本海、黄海、渤海是主要产地，在我国主要分布于黄海、东海、南海，台湾省。

在水产养殖业里，海鲈养殖占有重要地位，随着海鲈集约化养殖规模不断扩大，加之受管理技术相对滞后和养殖水环境污染严重等诸多因素的影响，海鲈养殖业病害频发且日趋严重。病害已给养殖生产造成了极大的经济损失，严重威胁了海鲈养殖业的稳定与发展。

海鲈的疾病可分为病毒类、细菌类、真菌类、寄生虫类等，其中病毒性流行病发病急往往来不及诊治就已经开始蔓延，且常常呈暴发式传播，传播范围广以及防治困难等特点，是目前困扰海鲈养殖发展的突出问题。细胞肿大病毒属(Megalocytivirus)虹彩病毒，是目前发现的危害鱼类健康的重要病毒性病原之一，该属代表毒株是鳜传染性脾肾坏死病毒(Infectious spleen and kidney necrosis virus,ISKNV)和真鲷虹彩病毒(Red seabream iridovirus,RSIV)，此外，还分离到赤点石斑鱼虹彩病毒(Orange-spotted grouperiridovirus,OSGIV)，大菱鲆红体病虹彩病毒(Turbot reddish body iridovirus,TRBIV)，大黄鱼虹彩病毒(Large yellow croaker iridovirus,LYCIV)，牙鲆虹彩病毒(Koreanflounder iridovirus,FLIV)，矮鲈虹彩病毒(Dwarf gourami iridovirus,DGIV)，尖吻鲈虹彩病毒(Giant seaperch iridovirus,GSIV)，笋壳鱼虹彩病毒(Marble gobyiridovirus,MGIV)等等不同宿主来源的虹彩病毒；目前发现易感的养殖品种有鲈形目、鳕形目、鲽形目和鲀形目中的近百种海水、淡水鱼类。细胞肿大病毒属虹彩病毒的最适流行水温是28℃～30℃，所以多为春秋季节爆发，最高死亡率可达100％，也有研究表明。当水温低于18℃或者高于34℃时该病毒可感染鱼类而不出现任何临床症状。细胞肿大病毒属虹彩病毒的广泛分布性使得该属病毒可感染近百种淡水、海水鱼类且极可能造成大面积死亡，给水产养殖者造成重大经济损失。前期实验中我们分离到一株海鲈源虹彩病毒(Lateolabraxmaculatus iridovirus，LMIV)，具有较强的毒力，因此建立一种快速、灵敏、适合基层临床诊断的检测方法对该病毒的防控具有重要意义。

发明内容

基于此，本发明的目的在于提供一种高效、快速、灵敏的海鲈虹彩病毒的检测方法与试剂盒。

为实现上述目的，本发明具体技术方案如下：