[发明专利]一种鉴定不结球白菜速俊316种子纯度的引物及应用

权利要求书

1.一种采用特异性引物检测速俊316不结球白菜杂交种种子纯度的方法，其特征在于按如下的步骤进行：

（1）提取速俊316杂交种待测样品的基因组DNA；

（2）以上述样品的基因组DNA为模板，以InDel标记引物为特异性引物进行PCR扩增；反应体系为：10µL体系，包括：10×PCR Buffer，1.0 µL；2.5 mM dNTP，0.2 µL；10 µmol·L-1primers，0.4 µL；5 U·µL-1 Taq，0.2 µL；50 ng·µL-1 DNA，1.5 µL；ddH2O，6.7 µL；

采用的扩增程序为：94℃预变性5 min；94℃变性30 s，57℃复性30 s，72℃延伸30 s，35 个循环；72℃终延伸 5 min；所述的特异性引物为：

ATG CTT GGA GAT GAG ACA TGG ATC AAG SEQ ID NO:1

TTG CTC ATA TCA CCA TCA TAC AGA TAG GG SEQ ID NO:2；

（3）将上述PCR扩增获得的产物，进行聚丙烯酰胺凝胶电泳分离、银染，速俊316杂交种材料中，同时扩增出133bp和104bp的特异性条带；

（4）统计上述银染的结果：所检测速俊316杂交种纯度（%）=（检测种子总粒数-非杂交种粒数）/（检测种子总粒数）×100%。