[发明专利]一种鉴定不结球白菜速俊316种子纯度的引物及应用

说明书

本发明公开了一种用于检测速俊316不结球白菜杂交种种子纯度的InDel分子标记特异性引物，它为SEQ ID NO:1‑2所示的核苷酸序列。本发明进一步公开了利用特异性引物鉴定速俊316不结球白菜杂交种种子纯度的方法。本发明提供的特异性引物及方法，可以在实验室3‑5小时完成不结球白菜速俊316杂交种种子纯度鉴定，具有快速、稳定、不受环境影响等优点，能替代传统田间种子纯度鉴定方法，有利于速俊316不结球白菜杂交种种子高效准确的质量控制。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种鉴定不结球白菜速俊316杂交种种子纯度的引物序列及应用。

背景技术

不结球白菜（Brassica rapa L. ssp. chinensis Makino）属十字花科芸薹属作物，又名小白菜、青菜、油菜（我国北方地区），原为我国长江中下游及以南地区的一种全年四季种植和供应的蔬菜，现已成为一种重要的全国性绿叶蔬菜，并且在日本、韩国等国外的种植面积也越来越大。

不结球白菜传统的种子纯度鉴定方法，一般采取田间种植，待生长到特定时期，观察生长特性，鉴定种子的纯度，具有周期长、用工量大、易受环境影响等缺点。随着分子生物学的发展，分子标记辅助育种技术在农业育种中的应用越来越广，利用InDel分子标记，可以直接鉴定样品间基因组DNA水平的差异，用于鉴定种子的纯度，具有用时短、重复性好、不受环境影响等优点。

速俊316是天津科润农业科技股份有限公司蔬菜研究所育成的不结球白菜系列杂交种之一，具有生长速度快，束腰早，株型美观，产量高，适收期长，品质佳等特点。该品种叶色鲜绿，叶柄较短，宽厚亮泽，无蜡粉，抗病性强，适应性广。该品种一直采用传统的田间方法鉴定种子纯度，经常造成种子纯度鉴定时间与销售周期相冲突。需要开发一种快速、准确的种子纯度鉴定方法，以适应速俊316的推广及用种量的增加。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测速俊316不结球白菜杂交种种子纯度的InDel标记的引物序列及应用，为实现该目的，本发明采用以下技术方案：

一种用于检测速俊316不结球白菜杂交种种子纯度的特异性引物，其特征在于它为SEQ ID NO:1-2所示的核苷酸序列：

ATG CTT GGA GAT GAG ACA TGG ATC AAG SEQ ID NO:1

TTG CTC ATA TCA CCA TCA TAC AGA TAG GG SEQ ID NO:2。

本发明进一步公开了采用所述的特异性引物检测速俊316不结球白菜杂交种种子纯度的方法，其特征在于按如下的步骤进行：

（1）提取速俊316杂交种待测样品的基因组DNA；

（2）以上述样品的基因组DNA为模板，以标记引物为特异性引物进行PCR扩增；反应体系为：10µL体系，包括：10×PCR Buffer，1.0 µL；2.5 mM dNTP，0.2 µL；10 µmol·L-1primers，0.4 µL；5 U·µL-1 Taq，0.2 µL；50 ng·µL-1 DNA，1.5 µL；ddH2O，6.7 µL。采用的扩增程序为：94℃预变性5 min；94℃变性30 s，57℃复性30 s，72℃延伸30 s，35 个循环；72℃终延伸 5 min；所述的特异性引物为：

ATG CTT GGA GAT GAG ACA TGG ATC AAG SEQ ID NO:1

TTG CTC ATA TCA CCA TCA TAC AGA TAG GG SEQ ID NO:2；

（3）将上述PCR扩增获得的产物，进行聚丙烯酰胺凝胶电泳分离、银染；