[发明专利]一种巴斯德毕赤酵母及其应用

说明书

本发明公开了一种巴斯德毕赤酵母及其应用。所述的巴斯德毕赤酵母的保藏编号为CCTCC NO:M 2016763。本发明的巴斯德毕赤酵母菌株的多肽表达量同现有技术中的同种菌株相比有大幅提高，提高幅度可达36.32％。另外，本发明中的巴斯德毕赤酵母的表达产物对于紧密连接蛋白ZO‑1、层粘连蛋白和纤连蛋白的表达量具有明显的增强作用，可用于紧密连接蛋白ZO‑1、层粘连蛋白和纤连蛋白的基因表达上调剂的制备。

技术领域

本发明属于微生物领域，具体涉及一种巴斯德毕赤酵母及其应用。

背景技术

太空育种主要是通过强辐射，微重力和高真空等太空综合环境因素诱发生物的基因变异。一方面太空环境存在着诱发生物突变的多种因素，太空诱变育种是有效的育种手段，能够大大缩短新品种的研发周期。另一方面，空间环境对微生物的形态结构、生长速率、代谢活动、基因表达等都会产生重要影响。微生物体积小，培养条件简单，相对于高等生物更容易引起变异，是空间生物学研究中较好的材料。

酵母菌是一类群体庞大的单细胞真核微生物。目前，酵母表达系统是常用的真核表达系统之一，已广泛用于外源基因的表达，在蛋白药物开发应用方面具有广阔前景，如类胰岛素生长因子、人血清白蛋白等已经用于临床治疗。酵母表达系统表达外源基因的优点在于：既具有原核生物生长快、培养成本低、遗传操作简单的特点，又有哺乳类细胞的翻译后加工和修饰功能，如二硫键的形成、蛋白磷酸化、糖基化等，因此利用酵母表达系统有利于保持生物产品的活性和稳定性；不会产生毒素，安全可靠；能分泌表达，有利于纯化。巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)能利用甲醇作为碳源，其是优良的外源基因表达系统，在生物制药领域有广泛应用，是近年来被公认的最有效的外源蛋白表达系统之一。

虽然目前有多个菌种进行过空间搭载，但并没有针对巴斯德毕赤酵母这一优良的基因工程表达系统进行空间诱变的研究。空间环境是否能提高巴斯德毕赤酵母的外源基因表达水平还有待探索，空间作用的生化和分子生物学机制，包括是否从转录因子、调节蛋白等方面诱导巴斯德毕赤酵母中基因的差异表达，也还没有进行深入探讨和阐释。

另外，紧密连接蛋白、层粘连蛋白和纤连蛋白三种蛋白在皮肤的表皮层、真表皮连接处和真皮层有表达，随着年龄的增长，该三种蛋白中的一种或多种表达量均有下降，从而造成皮肤上皱纹的增加。然而迄今为止，现有技术中可以同时增强这三种蛋白表达的物质鲜少有报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是针对现有技术中缺乏提高紧密连接蛋白ZO-1、层粘连蛋白和/或纤连蛋白的基因表达的物质的缺陷，提供一种巴斯德毕赤酵母及其应用。本发明的巴斯德毕赤酵母菌株的多肽表达量同现有技术中的同种菌株相比有大幅提高，提高幅度可达36.32％。另外，本发明中的巴斯德毕赤酵母的表达产物对于紧密连接蛋白ZO-1、层粘连蛋白(尤其是层粘连蛋白332)和纤连蛋白的表达量具有明显的增强作用，可用于紧密连接蛋白ZO-1、层粘连蛋白和纤连蛋白的基因表达上调剂的制备。

发明人选取出发菌株，即搭载前航天酵母(JBA-SP02-CK-01-Gly-01)，其专利保藏编号为CGMCC NO:13476，通过“实践十号”实验卫星平台，利用空间诱变的手段对出发菌株SP02-CK-01进行太空环境诱变改造，意外获得寡肽表达水平高、活性好、纯度高的诱变菌株SP02-DZ-08，即二代航天酵母(JBA-SP02-DZ-08-Gly-01)，保藏编号为CCTCC NO:M2016763。发明人意外发现该巴斯德毕赤酵母发酵产物滤液可提高紧密连接蛋白ZO-1、层粘连蛋白和纤连蛋白的信号表达量，而该三种蛋白可从皮肤的表皮层、真表皮连接处和真皮层三个层面来全面加强结合紧密度，增强皮肤细胞的“连接结合-沟通交流-运输”，因而航天酵母发酵产物滤液具有良好的护肤功效。

本发明解决上述技术问题的技术方案之一为：一种巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)，其保藏编号为CCTCC NO:M 2016763。