[发明专利]猪流行性腹泻病毒G1/G2型RT-PCR鉴别引物组及其诊断试剂盒在审
| 申请号： | 201910281185.0 | 申请日： | 2019-04-09 |
| 公开（公告）号： | CN109825649A | 公开（公告）日： | 2019-05-31 |
| 发明（设计）人： | 欧阳康;王若木;孙连静;钟莲;黄伟坚;韦祖樟;陈樱 | 申请（专利权）人： | 广西大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 广西南宁公平知识产权代理有限公司 45104 | 代理人： | 杨立华 |
| 地址： | 530004 广西壮族*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 猪流行性腹泻病毒 诊断试剂盒 引物 流行病学调查 特异性引物 养猪业 碱基序列 鉴别引物 经济损失 快速鉴别 试验研究 准确检测 反应管 灵敏度 引物组 毒株 猪群 病因 耗时 鉴别 感染 检测 治疗 应用 制定 | ||
1.猪流行性腹泻病毒G1/G2型RT-PCR鉴别引物组，其特征在于包括两对特异性引物，分别是引物PEDV-BF和PEDV-BR、引物PEDV-F和PEDV-R，它们分别具有序列表SEQ.ID.NO.1至SEQ.ID.NO.4的碱基序列。
2.根据权利要求1所述的猪流行性腹泻病毒G1/G2型RT-PCR鉴别引物组，其特征在于：所述引物PEDV-BF、PEDV-BR、引物PEDV-F和PEDV-R的摩尔比为1：1：1：1。
3.权利要求1所述猪流行性腹泻病毒G1/G2型RT-PCR鉴别引物组在PCR扩增方面的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述PCR扩增中，引物PEDV-F和PEDV-R为PED通用检测引物，其针对E基因序列为基础在核苷酸的第1-24位和第208-231位处设计；引物PEDV-BF和PEDV-BR为G2型特异性检测引物，其针对G1型与G2型毒株在S基因处的特异性差异，在其核苷酸第164-184位和第982-1003位处设计。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述PCR扩增的退火温度为55℃。
6.一种猪流行性腹泻病毒G1/G2型RT-PCR诊断试剂盒，其特征在于含有以下试剂：PCR标准品、阳性对照品、阴性对照品、引物；所述引物包括两对特异性引物，分别是引物PEDV-BF和PEDV-BR、引物PEDV-F和PEDV-R，它们分别具有序列表SEQ.ID.NO.1至SEQ.ID.NO.4的碱基序列。
7.根据权利要求6所述的猪流行性腹泻病毒G1/G2型RT-PCR诊断试剂盒，其特征在于：所述PCR标准品包括PEDV G1型毒株标准品和PEDV G2型毒株标准品；所述阳性对照品含PEDV G1型毒株、PEDV G2型毒株的阳性质粒混合物；所述阴性对照品为灭菌后去离子水。
8.根据权利要求7所述的猪流行性腹泻病毒G1/G2型RT-PCR诊断试剂盒，其特征在于：所述PEDV G1型毒株标准品和PEDV G2型毒株标准品分别具有序列表SEQ.ID.NO.5至SEQ.ID.NO.6的碱基序列。
9.根据权利要求6所述的猪流行性腹泻病毒G1/G2型RT-PCR诊断试剂盒，其特征在于：所述引物中，两对特异性引物的上游引物PEDV-BF和引物PEDV-F同管包装，两种特异性引物的下游引物PEDV-BR和PEDV-R同管包装。
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