[发明专利]一种用于检测副溶血弧菌的试剂盒、引物对、探针及方法

权利要求书

1.一种用于检测副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）的试剂盒，其包括RPA反应体系，其特征在于，所述的RPA反应体系包括RPA引物探针混合液，所述RPA引物探针混合液包括一引物对和探针，所述引物对中上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO. 1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO. 2所示；所述探针如下式所示：5’-FAM-SEQ ID NO. 3-THF-SEQID NO. 4-Spacer C3-3’。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述RPA反应体系包括：2.1 μL浓度为10 μM的所述上游引物、2.1 μL浓度为10 μM的所述下游引物、0.6 μL浓度为10 μM的所述探针、29.5 μL水化缓冲液、12.2μL双蒸水以及2.5 μL浓度为280 μM的醋酸钠。

3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括阴性对照和/或阳性对照。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述的阴性对照为双蒸水；

所述的阳性对照为副溶血弧菌DNA。

5.如权利要求1~4任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述的RPA为RPA-LF。

6.一种用于检测副溶血弧菌的寡核苷酸组，所述的寡核苷酸组包括一对引物对以及一个探针，所述引物对中上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO. 1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO. 2所示；所述探针如下式所示：

5’-FAM-SEQ ID NO. 3-THF-SEQ ID NO. 4-Spacer C3-3’。

7.如权利要求6所述的寡核苷酸组，其特征在于，所述的检测为RPA检测。

8.如权利要求7所述的寡核苷酸组，其特征在于，所述的RPA检测为RPA-LF检测。

9.如权利要求6~8任一项所述的寡核苷酸组在制备检测副溶血弧菌的试剂或试剂盒中的应用。

10.一种非诊断目的的检测副溶血弧菌的方法，其特征在于，其包括如下步骤：

（1）使用DNA提取试剂提取待检样品中的总DNA；

（2）以步骤（1）提取的总DNA为模板，利用权利要求1~5任一项所述试剂盒中的RPA反应体系进行RPA反应；

（3）分析检测结果。

11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，步骤（2）中所述RPA反应中扩增反应的时间为20 min、温度为37℃或39℃。

12.如权利要求10所述的方法，其特征在于，步骤（2）中所述的RPA为RPA-LF。

13.如权利要求10所述的方法，其特征在于，步骤（2）中所得扩增产物为一端标记荧光素，一端标记生物素的双标记产物。

14.如权利要求13所述的方法，其特征在于，步骤（3）中的分析方法为用Milenia ®GenLine HybriDetect MGHD1胶体金侧流层析试纸条对所述双标记产物进行检测。

15.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述的双标记产物为稀释后的双标记产物。