[发明专利]一种基于黄腐酸联合盐胁迫提高单针藻油脂积累的方法

说明书

本发明公开了一种基于黄腐酸联合盐胁迫提高单针藻油脂积累的方法，属于微藻生物技术领域。首先在以10g/L葡萄糖为碳源的基础培养基(BG‑11)中无光照异养培养单针藻藻种，待藻种生长至稳定期后接种至诱导培养基(Kuh1)中，置于25℃条件下，进行光照摇瓶培养。离心收集藻细胞，利用有机溶剂氯仿/甲醇(2:1，v/v)提取油脂，上述所提油脂通过甲酯化制备得到生物柴油。本发明操作简单易行，不仅可以促进单针藻的生长，还可以促进油脂的积累。

技术领域

本发明属于微藻生物技术领域，具体涉及一种基于黄腐酸联合盐胁迫提高单针藻油脂积累的方法。

背景技术

生物柴油作为一种生物质能，是以油料作物和工程微藻以及动植物油脂等为原料油通过酯交换或热化学工艺制成的可代替石化柴油的再生性柴油燃料，其在物理性质上与石化柴油接近，但化学组成不同。微藻，作为生产生物柴油的主要原料之一，广受研究人员的好评，但通过传统方式培养微藻，不仅生长周期长，油脂含量也相对较低。研究发现，可以采用不同条件对微藻进行培养以达到提高油脂积累的目的，进而优化微藻生产生物柴油的工程方案。研究表明，植物激素可以促进微藻的生长，通过联合非生物胁迫的作用可以进而促进油脂积累。

黄腐酸(fulvic acid，FA)是腐殖酸的一个组分,易溶于水且分子量小，易被植物吸收，是一种植物生长调节剂，能促进植物生长，提高作物产量、品质作用，并能提高植物的抗逆能力。黄腐酸在农业生产上的作用较多，比如，促进根系发育，使农作物吸收较多水分和养分，从而提高作物抗旱能力。此外，黄腐酸还能提高多种合成酶活性和叶绿素含量，使光合作用增强，从而提高植物的产量与品质。

研究表明，通过植物生长调节剂和非生物胁迫的联合应用对微藻油脂的富集具有显著的效果。黄腐酸的应用可以在一定程度上促进藻细胞的生长。植物生长调节剂是调节生长发育各个方面的化学信使，在适宜浓度下可以促进植物细胞内某些酶的活性从而可以有效促进植物的生长。此外，有研究表明，不同的非生物胁迫对微藻生产生物柴油具有明显的影响，高光照、缺氮、高温等均可提高单针藻油脂含量。在植物生长调节剂诱导条件下，对微藻生长环境进行一定程度的非生物胁迫，可有效提高微藻中油脂的含量。目前基于黄腐酸诱导联合盐胁迫对微藻生长及油脂含量影响的研究鲜见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于黄腐酸诱导联合盐胁迫提高单针藻油脂积累的方法，该方法异养培养微藻藻种至稳定期，接种至光自养黄腐酸诱导培养基中，同时结合盐胁迫诱导藻细胞大量积累油脂，利用有机溶剂提取藻细胞内油脂；本发明操作简单，能够在短期内促进微藻的生长，同时提高油脂的含量。

本发明所采用的技术方案是，一种基于黄腐酸诱导联合盐胁迫提高单针藻油脂积累的方法，包括以下步骤：

(1)制备诱导培养基；

(2)接入单针藻进行摇瓶培养；

(3)制备生物柴油。

优选的，所述步骤1中制备诱导培养基具体为：选择Kuh1培养基作为基本培养基，分装250mL于500mL锥形瓶中，添加25mg/L黄腐酸；在上述培养基中添加不同浓度的氯化钠，调整pH值在6.8-7.0之间，培养基高温高压灭菌121℃，20min。

优选的，所述NaCl的浓度分别为0g/L、5g/L、10g/L、15g/L、20g/L、25g/L、30g/L；

优选的，所述单针藻Monoraphidium sp.QLY-1初始接种量为0.7g/L；光照强度3500～4000lux；摇床转速150r/min，温度25℃。