[发明专利]一株重组鹦鹉热衣原体外膜蛋白MOMP基因的粗糙型布鲁氏菌及其疫苗生产方法

说明书

本发明涉及一株重组鹦鹉热衣原体(Cps)外膜蛋白MOMP基因的粗糙型布鲁氏菌的构建及其疫苗。本发明以粗糙型牛种布鲁氏菌弱毒株RA343株为亲本株，以蔗糖自杀质粒为载体，将含有特定启动子序列的鹦鹉热衣原体外膜蛋白MOMP基因经密码子优化后无痕插入到了布鲁氏菌基因组中，成功构建了能够高效表达型鹦鹉热衣原体外膜蛋白MOMP基因的重组布鲁氏菌RA343‑MOMP株。该重组菌株不仅保留了原始亲本株RA343的粗糙型特性，对布鲁氏菌病(布病)良好的免疫保护性，而且该重组菌免疫动物后，能产生针对鹦鹉热衣原体MOMP抗体，从而实现对鹦鹉热衣原体的免疫保护。用该重组苗株制备的疫苗，免疫动物后能同时实现对布病和鹦鹉热衣原体的双重免疫保护。

所属技术领域

本发明涉及一株重组鹦鹉热衣原体外膜蛋白MOMP基因的粗糙型布鲁氏菌及其疫苗生产方法，属于兽用生物制品领域。

技术背景

布鲁氏菌病(布病)是由布鲁氏菌(Brucella)引起的以流产和发热为特征的人兽共患病，严重地威胁着人和多种动物的生命健康。本病不但对动物的繁殖和生产性能具有严重危害，更重要的是，人感染布鲁氏菌后，往往难以治愈，从而造成严重的公共卫生问题。因此在布鲁氏菌流行的国家，消除布病一直是公共卫生计划中最重要的目标之一。目前全世界范围内消除该病的主要方法是扑杀与免疫相结合，对布病发生相对比较严重的中国，由于扑杀的成本高，疫苗预防成为本病主要控制手段。

2007—2012年间，本实验室陆续从我国不同省份和地区牛、羊、犬和鹿等动物体内分离到牛种布鲁氏菌41株，羊种布鲁氏菌74株，犬种布鲁氏菌9株。研究过程中，我们初步发现了一株牛种布鲁氏菌分离株，其毒力介于强毒和疫苗毒之间，专利申请人已对其进行了全面的生化检定，并分别用小鼠和豚鼠测定了其毒力。结果发现其毒力介于强毒和弱毒之间，测定为中等毒力布鲁氏菌，命名为Abortus 343。本发明对此分离株进行了诱导和驯化，筛选获得了稳定的粗糙型布鲁氏菌疫苗株，命名为RA343，并已取得相关专利(ZL201410240895.6)。目前该疫苗株已经完成了全部的实验室研发和临床试验，进入新兽药注册环节。

鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci，Cps)是造成羊地方性流产的主要病原菌之一，首次感染Cps的受孕绵羊和山羊的流产率分别高达30％和70％，给许多国家畜牧业造成重大损失。疫苗研究一只是预防病原感染的重要手段，基因工程亚单位疫苗由于其安全性而越来越受到人们的青睐。Cps主要外膜蛋白(MOMP)是种特异性抗原，通过基因工程表达的r-Cps-MOMP具有良好的免疫原性及免疫保护作用。

发明内容

本发明的目的是以粗糙型牛种布鲁氏菌弱毒株RA343株为亲本株，利用蔗糖自杀质粒为载体，将含有特定启动子序列的鹦鹉热衣原体外膜蛋白MOMP基因经密码子优化后无痕插入到了布鲁氏菌基因组中，成功生物技术构建的构建了能够高效表达鹦鹉热衣原体外膜蛋白MOMP基因的重组布鲁氏菌RA343-MOMP株。该重组菌株不仅保留了原始亲本株RA343的粗糙型特性，对布鲁氏菌病(布病)良好的免疫保护性，而且该重组菌接种动物后，能产生针对Cps MOMP抗体，从而实现对鹦鹉热衣原体的免疫保护。该重组疫制备的疫苗，免疫动物后能同时实现对布病和鹦鹉热衣原体的双重免疫保护。

本发明技术方案