[发明专利]检测猪Pegivirus的套式RT-PCR引物组、试剂盒及应用

说明书

本发明涉及生物技术技术领域，特别涉及一种检测猪Pegivirus的套式RT‑PCR引物组、试剂盒及应用。所述的检测猪Pegivirus的套式RT‑PCR引物组，其特征在于包含外围引物PPgV–F1、PPgV–R1，内围引物PPgV–F2、PPgV–R2，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1～4所示，本发明还提供了一种包含上述引物组的试剂盒，该试剂盒采用一步法RT‑PCR和套式PCR相互配合，可高效、快速、特异地扩增目标序列，适用于疫病病原确诊和病原净化检测，例如：出入境现场、养殖场等。

技术领域

本发明涉及生物技术技术领域，特别涉及一种检测猪Pegivirus的套式RT-PCR引物组、试剂盒及应用。

背景技术

Pegivirus(发音为peh-gee病毒)是一种新出现的从发病动物的血清中分离的病毒。Pegivirus是小包膜的单链正义RNA病毒，其基因组大小为9～13kb核苷酸，基因组表征已将所有已知的Pegivirus分类为黄病毒科佩吉病毒属中的11种(A-K)。猪Pegivirus(PPgV)属于Pegivirus K的成员。

Pegivirus可感染包括人类、灵长类动物、猪、马、啮齿动物和蝙蝠等多种哺乳动物。但大多数Pegivirus的致病性是未知的，据报道仅Pegivirus D可引起急性马肝炎或马的血清相关性肝炎。尽管PPgV阳性的猪表现出跛足和水疱等特征性临床症状，但先前的研究报道表明，在PPgV的动物致病性研究中，PPgV对感染猪没有明显的临床效果，因此PPgV感染与任何特定临床疾病之间的关联有待进一步研究。

来自德国和美国的猪中检测到猪的Pegivirus，表明PPgV的广泛的地理分布。已有文献报道我国猪群中已经检测到Pegivirus，而目前，我国鲜有关于PPgV研究的相关报道。针对目前该病的确诊和扩散控制，急需提出和制定快速的诊断方法与有效的防控策略。

发明内容

为了克服现有技术中缺少检测PPgV成熟技术方案的不足和缺点，本发明的首要目的在于提供一种检测猪Pegivirus的套式RT-PCR引物组，该引物组能快速、准确、高效地检测鉴定PPgV，特异性好，灵敏度高。

本发明的另一目的在于提供一种检测猪Pegivirus的试剂盒，该试剂盒包括上述引物组，该试剂盒可高效、准确地检测鉴定PPgV。

本发明的再一目的在于提供上述检测猪Pegivirus的套式RT-PCR引物组和试剂盒的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种检测猪Pegivirus的套式RT-PCR引物组，包含外围引物PPgV–F1、PPgV–R1，内围引物PPgV–F2、PPgV–R2，其核苷酸序列如下所示：

引物PPgV–F1：5′-ACGGTTGGWCGTTTGAGGAG-3′；

引物PPgV–R1：5′-ACAAGCGGAAAGTGACAKGAAT-3′；

引物PPgV–F2：5′-CACCCYTTTATGCTTACTGCC-3′；

引物PPgV–R2：5′-CCCRCGAGCRAAAATCATACC-3′；

其中，K、Y、R和W表示简并碱基代码，K＝G/T；Y＝C/T；R＝A/G；W＝A/T；

所述的检测猪Pegivirus的套式RT-PCR引物组在检测猪Pegivirus领域中的应用；

所述的检测猪Pegivirus的套式RT-PCR引物组在检测猪Pegivirus领域中的应用，不包含疾病的诊断目的；

一种检测猪Pegivirus的试剂盒，包含上述检测猪Pegivirus的套式RT-PCR引物组；