[发明专利]化妆品中糖皮质激素和性激素色谱-质谱检测方法

权利要求书

1.一种化妆品中糖皮质激素和性激素色谱-质谱检测方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)提取：对于水含量高的化妆水化妆品，称取0.50g待测化妆品样品于50mL塑料离心管中，然后加入9.5mL专用提取剂和10mL正己烷，漩涡混合2～3min，4000转/min离心5min，分成两层；对于水含量较少的乳液化妆品：称取0.50g待测化妆品样品于50mL塑料离心管中，加入专用提取剂和正己烷各10mL，漩涡混合2～3min，4000转/min离心5min，分成两层；

(2)净化：移取1.5mL下层清液到专用净化管中，充分漩涡混匀2min，10000转/min离心2min，取750μL上清液，用等量的水稀释后，经0.2μm孔径的尼龙滤膜过滤到进样瓶中，待LC-MS/MS测定，所述的专用提取剂由乙腈、甲醇、四氢呋喃、二甲亚砜和水按体积比3∶4∶2∶1∶3的比例混合而成；所述的专用净化管由C₄填料和陶瓷均质子组成，所述的C₄填料的填充量为50mg/mL溶剂，所述的C₄填料为硅胶键合丁基基团的填料，粒径为40-50μm；所述的陶瓷均质子数量为15mL试管中含有4粒陶瓷均质子，所述的陶瓷均质子的大小为直径×长度＝3×6mm；

所述的LC-MS/MS测定方法如下：色谱柱：Acquity Waters HSS-T₃ C₁₈；柱温：45℃；流速：250μL/min；流动相A为含2.5mmol/L乙酸铵的水溶液和B为甲醇；进样量为10μL；流路切换：0～7.5min切换阀打开，色谱柱流出液进入废液，7.5min后开始质谱采集；流动相梯度参数设置见表1，

表1.目标物的UPLC流动相梯度参数设置

时间min	流速mL/min	流动相A	流动相B
0.0	0.25	100	0
0.2	0.25	100	0
14.0	0.25	0	100
17.0	0.25	0	100
17.1	0.25	100	0
20.0	0.25	100	0

；

通过多反应监测进行数据采集，正负离子模式毛细管电压分别为3.5和2.8kV；离子源温度：150℃；去溶剂气温度：500℃；去溶剂流速：900L/h；锥孔流速：100L/h；碰撞气体：氩气3.3×10^-3mba，其它参数设置见表2，

表2.LC-MS/MS采集参数设置

化合物名称	电喷雾电离模式	锥孔电压V	定量离子对	定性离子对
甲睾酮	ESI+	26	303.4＞97	303.4＞109
地塞米松	ESI+	30	393.2＞146.9	393.2＞355
己酸羟孕酮	ESI+	14	429.6＞109	429.6＞313.4
丙酸倍他米松	ESI+	14	521.2＞319.1	521.2＞503
己烯雌酚	ESI-	32	267.2＞237.1	267.2＞251.1

。

2.根据权利要求1所述的化妆品中糖皮质激素和性激素色谱-质谱检测方法，其特征在于还包括基质标准曲线制备的步骤，具体如下：将激素溶于甲醇溶液中配成浓度为1.0mg/mL，并稀释成100ng/mL标准工作液，在0.50g空白的乳液化妆品中依次添加0、2、5、10、40、160、320ng标准工作液，静置15min，按权利要求1所述的方法进行提取和净化，以激素浓度为横坐标，目标物的响应值为纵坐标，做基质添加标准曲线，作为试样处理液中待测物浓度定量的依据。