[发明专利]一种双重DNA机器检测microRNA-21的方法

权利要求书

1.一种双重DNA机器检测microRNA-21的方法，其特征在于包括：

（1）将T4连接酶缓冲液、5’端磷酸化处理的锁式探针、microRNA-21和去离子水均匀混合，使所得混合物于90～95℃加热2～5 min，冷却至室温，再加入5～10 U T4连接酶，之后使所得第一反应体系于16～25℃反应30～60 min，形成环状DNA模板；

（2）使包含步骤（1）所获第一反应体系、1-2 μL DNA聚合酶缓冲液、1～2 μL回文发夹探针、1～2 μL dNTPs、3～5 μL DNA聚合酶和5～10 U 限制性核酸内切酶的第二反应体系于30～37℃孵育反应1～2.5 h，得到扩增产物；

（3）根据步骤（1）和（2），对一系列不同浓度microRNA-21标准溶液进行定量检测，测定扩增产物在激发光波段的荧光强度值，获得microRNA-21浓度-荧光强度值标准曲线；

（4）根据步骤（1）和（2），对含有microRNA-21的待测生物样品进行检测，测定扩增产物在激发光波段的荧光强度值，并与所述标准曲线对照，从而测得待测生物样品中microRNA-21的浓度；

其中，所述锁式探针的序列如SEQ ID NO: 1所示，所述回文发夹探针的序列如SEQ IDNO: 2所示。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述DNA聚合酶包括Klenow酶。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述限制性核酸内切酶包括Nb. BbvCI。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于包括：将标准microRNA-21粉末用DEPC处理后的水溶解，得到储存液，所述储存液继续用DEPC处理后的水逐级稀释，获得一系列不同浓度的microRNA-21标准溶液。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述激发光波段的波长为 490 nm。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述待测生物样品包括人血清。

7.一种产品，应用于权利要求1-6中任一项所述的方法中，其特征在于：所述的产品包括锁式探针和回文发夹探针，所述锁式探针的序列如SEQ ID NO: 1所示，所述回文发夹探针的序列如SEQ ID NO: 2所示。