[发明专利]一种基于稳定同位素检测的无标记核酸酶分析方法

权利要求书

1.一种对核酸酶的分析方法，其特征在于：

所述分析方法包括DNA功能化的磁性微球合成和稳定同位素检测；

所述分析方法DNA模板序列包括（1）5’-TTT TTT TTT (… …) TTT TTT-3’单链DNA（PolyT-ssDNA）；（2）可以作为模板合成CuNPs的双链DNA（具有大量A-T碱基对的双链DNA）；

所述分析方法探针序列中，TTT TTT TTT (… …) TTT TTT序列为聚胸腺嘧啶核酸序列与具有大量A-T碱基对的双链DNA都可以在抗坏血酸和硫酸铜的作用下快速原位合成铜纳米粒子。

2.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于：

所述分析方法采用电感耦合等离子体质谱仪（ICPMS）稳定同位素分析；

DNA模板首先与磁性微球（MBs）组装，再与和待测核酸酶发生酶切反应，未反应的DNA模板可以在抗坏血酸和硫酸铜作用下快速原位合成铜纳米粒子，经过磁性分离和硝酸消解后可以进行ICPMS稳定同位素检测；

对不同浓度核酸酶对应的63Cu同位素的ICPMS强度信号采用线性回归分析，即可实现对核酸酶的高灵敏稳定检测。

3.根据权利要求1，2所述的分析方法，其特征在于：

所述分析方法中DNA模板与核酸酶反应所用缓冲溶液为PBS（10mM，pH=7.4），时间为90-120min,温度为37℃；

所述分析方法中，DNA模板与抗坏血酸和硫酸铜的反应缓冲溶液为MOPS(10 mM MOPS,2mM MgCl2, 150mM NaCl, pH=7.6)，温度为20-25℃，时间为3-5min；

所述分析方法对Exo 检测的浓度范围为0.1 Unit/μL（U/μL）至20U/L，检出限为0.029U/μL；

所述分析方法对Exo 检测的浓度范围为0.1 U/mL至1.0U/mL，检出限为0.05U/mL。