[发明专利]一种基于物种特异性STR-SSR的近缘绵羊肉检测方法

说明书

本发明属于食品检测技术领域；具体检测方法如下：提取标准羊肉和待测羊肉样品DNA、分别检测提取的标准样品DNA和待测样品DNA羊肉样品DNA浓度、对标准样品DNA和待测样品DNA的SSR基因序列进行荧光标记、利用SSR序列设计的引物进行PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增结果、毛细管电泳检测标准样品和待测样品的SSR基因序列分型、构建STR‑SSR标准分型峰值谱图；本发明用于特异性地鉴别出滩羊、小尾寒羊和滩寒杂交羊，该方法耗时短,操作简便,特异性强,采用峰值谱图对检测结果进行比对，检测结果能互相验证,可以用于无法从形态学上加以识别的三种近缘绵羊物种的精确鉴定，有利于滩羊产业的持续健康发展和消费者权益。

技术领域：

本发明属于食品检测技术领域，具体涉及一种基于物种特异性STR-SSR的近缘绵羊肉检测方法。

背景技术：

SSR是Simple Sequence Repeat的缩写，意思是简单重复序列标记，SSR是以PCR技术为核心的DNA分子标记技术，或称微卫星序列标记(Microsatellite sequence，MS)，或短串联重复标记(Short Tandem Repeat，STR)。

1982年，Hamade等人发现了简单重复序列标记(SSR)技术，或称微卫星序列标记(Microsatellite sequence，MS)，或短串联重复标记(Short Tandem Repeat，STR)。真核生物基因组中存在大量重复频率极高而顺序复杂性极低的串联重复序列。按重复基序的长度可将串联重复序列分为卫星DNA(基序100-300bp)、小卫星DNA(基序10-60bp)、微卫星DNA(基序1-6bp)和中卫星DNA(由不同大小串联重复组成)等。微卫星是由DNA复制或修复过程中DNA滑动和错配或者有丝分裂、减数分裂期姐妹染色单体不均等交换引起的。微卫星的突变率在不同物种、同一物种的不同位点或同一位点的不同等位基因间存在很大差异。尽管微卫星DNA分布于整个基因组的不同位置，但其两端序列多是保守的单拷贝序列，根据这两端的序列设计一对特异引物，通过PCR技术将期间的核心微卫星DNA序列扩增出来，利用电泳分析技术就可以得到其长度的多态性，此即SSR标记的原理。SSR或STR标记具有高度重复性、丰富的多态性、共显性、高度可靠性等优点。

滩羊(Tan sheep)是宁夏优势特色畜种，国家二级保护绵羊畜种。宁夏盐池县为滩羊主产区，优良的遗传型加之盐池县土壤、水矿物质丰富，牧草品种繁多等特殊生态因素，使滩羊肉味美，质嫰，无腥膻味，深受我国及新丝路经济带许多国家、地区消费者青睐。滩羊产业是宁夏极力打造的优势特色产业。因滩羊为单羔生，产量小，全宁夏年出栏数仅300万只，市场供不应求，价格看好，于是，一些不法经销商将多羔生小尾寒羊及滩寒杂交羊肉冒充滩羊肉混淆售卖，严重影响了滩羊产业的持续健康发展和消费者权益。因此，发明一种滩羊肉分子鉴定的方法，建立近缘绵羊属滩羊、小尾寒羊和滩寒杂交羊肉的精准鉴定方法成为宁夏滩羊产业发展必须突破的技术瓶颈。

滩羊、小尾寒羊和滩寒杂交羊是同属亚种范畴，亲缘关系非常接近，基因序列差异的研究分析是羊肉基原鉴定成功与否的关键。因此本发明基于物种特异性STR-SSR，解决了近缘三种绵羊鉴别困难的问题，建立了近缘绵羊属滩羊、小尾寒羊和滩寒杂交羊肉的精准鉴定方法。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种用于鉴别滩羊、小尾寒羊和滩寒杂交羊的方法。其能够解决现有技术中近缘三种绵羊肉滩羊、小尾寒羊和鉴别困难、成本高、检测时间长、误差大等问题。

一种基于物种特异性STR-SSR的近缘绵羊肉检测方法，具体检测方法如下：

第一步：提取标准羊肉和待测羊肉样品DNA：分别取25～50只滩羊、小尾寒羊和滩寒杂交羊的肌肉组织分别研磨成粉末，分别加到离心管中，加入细胞裂解液，离心处理至样品完全裂解，待用，其中提取的滩羊、小尾寒羊和滩寒杂交羊羊肉样品DNA为标准样品DNA；再次分别提取滩羊、小尾寒羊和滩寒杂交羊共计324只绵羊肉样品DNA，记为待测样品DNA；