[发明专利]听神经病谱系障碍相关的OTOF基因突变检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种听神经病谱系障碍相关的OTOF基因突变检测试剂盒，试剂盒包括从待测样品中提取DNA的试剂、用于扩增样本DNA的PCR反应试剂、对PCR扩增产物进行测序的试剂；所述扩增样本DNA的PCR反应试剂包括PCR引物。使用本发明所述试剂盒检测患者中是否存在OTOF基因NM_01287489.1:c.1945_1960del16bp缺失突变，从而诊断听神经病谱系障碍发生的原因。该试剂盒将有利于临床上开展听神经病谱系障碍患者的OTOF突变筛查工作，为听神经病谱系障碍患者的诊断提供依据。

技术领域

本发明涉及基因检测领域，具体涉及在诊断听神经病/听神经病谱系障碍中应用的OTOF基因突变c.1945_1960del16bp(p.R649Gfs*11)分型检测试剂盒。

背景技术

听神经病(auditory neuropathy,AN)是耳蜗内毛细胞、听神经突触或听神经功能不良所导致的听力障碍。它是导致婴幼儿和青少年语言交流障碍的重要疾病，在每年新发的听力损失患儿中约占8％，其发病与遗传因素密切相关。

听神经病依据发病部位分为两型：Ⅰ型听神经病为突触后型；Ⅱ型听神经病为突触及突触前型。人工耳蜗植入对于双耳重度感音神经性耳聋患者，是最好的治疗选择，但仅对Ⅱ型听神经病有效。听神经病诊断依靠听力学及影像学检查，但依据听力学检查结果无法进行分型，目前致病基因型是分型的主要依据。与Ⅱ型听神经病谱系障碍相关的基因主要是OTOF基因。

OTOF(otoferlin)基因是第一个克隆的与非综合征型听神经病相关的基因，位于2p23的DFNB9基因座内。OTOF基因DNA序列全长101496bp，共有4种长短不同的转录本变异体。其中最长的亚型包含48个外显子，编码氨基酸长度为1997aa的蛋白质Otoferlin。Yasunaga等对多个常染色体隐性非综合征型语前聋家系进行候选基因研究，发现三个家系共21名患病成员的OTOF基因都在第18个外显子发生无义突变，提前生成终止密码子并形成截短蛋白，致使其编码的Otoferlin蛋白不完整。在内耳中，Otoferlin蛋白在成熟的耳蜗中只表达于内毛细胞，且大多表达于内毛细胞基底外侧部。该蛋白是一种钙离子感受器，基因突变可导致内毛细胞活动区囊泡的胞吐作用被抑制，神经递质释放减少，进而引起神经冲动的减少；此外，神经递质可能对突触后神经纤维有营养作用，如营养作用的减弱可导致突触后膜产生退行性病变，或许可以解释听神经病谱系障碍(ANSD)患者渐进性听力损失的特点。

根据文献报道OTOF基因突变在世界范围内广泛存在于SNHL人群中，同时也是ANSD患者的主要致病突变。根据文献统计我国汉族ANSD患者中约5.5％的散发病例可将病因归于OTOF基因的突变。不同地区和种族ANSD人群的突变谱还不完善，目前已知的OTOF基因突变类型有100余种，绝大多数为无义突变、截短突变或移码突变。OTOF基因是目前研究最为广泛和深入的ANSD相关基因。

综合国内外文献报道的治疗经验，相比传统助听器和药物治疗，人工耳蜗植入的干预效果更为确切，但差异很大，具体到个体患者的选择仍需谨慎。以往研究认为可参考以下几个方面预测植入后的效果：1、术前MRI如发现中枢系统病变，可能预示术后效果不佳，尤其是有蜗神经缺失或形态异常时；2、基因突变类型与术后疗效的关系还不确定，现有研究结果可作为参考，通常认为OTOF突变引起突触前病变导致的ANSD术后效果较好，推测是人工耳蜗提供的直接电刺激绕过了病变部位，而轴突损伤导致突触后病变和涉及听神经全程的病变(如遗传性共济失调症和耳聋-肌张力不全症-视神经元病)引起的ANSD术后效果较差。所以明确听神经病/听神经病谱系障碍致病基因，对患者进行分型并评估人工耳蜗的植入效果具有重要意义。目前尚未见到关于OTOF基因缺失突变NM_01287489.1:c.1945_1960del16bp(p.R649Gfs*11)的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种听神经病谱系障碍相关的OTOF基因突变检测试剂盒。

为达到上述目的，本发明采用了以下技术方案：