[发明专利]药物损伤DNA功能化磁性纳米亲和探针及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种药物损伤DNA功能化磁性纳米亲和探针，其特征在于，该亲和探针包括磁性纳米颗粒、偶联结构和负载在所述磁性纳米颗粒表面的药物损伤DNA，其中，所述偶联结构的一端与所述磁性纳米颗粒相连，另一端与所述药物损伤DNA相连，且所述偶联结构为所述磁性纳米颗粒修饰的第一化学反应活性基团与所述药物损伤DNA修饰的第二化学反应活性基团通过化学反应而共价键合得到的结构。

2.根据权利要求1所述的亲和探针，其中，所述磁性纳米颗粒为Fe₃O₄磁性纳米颗粒和/或Fe₃O₄@SiO₂核壳结构的复合磁性纳米颗粒，其中，所述Fe₃O₄@SiO₂核壳结构的复合磁性纳米颗粒的内核为Fe₃O₄纳米粒子，外层包裹SiO₂；

优选地，所述磁性纳米颗粒的平均粒径为10-500nm。

3.根据权利要求1或2所述的亲和探针，其中，当所述第一化学反应活性基团为炔基类基团时，如端炔基、环辛炔、二苯并环辛炔，所述第二化学反应活性基团为叠氮基；当所述第一化学反应活性基团为叠氮基时，所述第二化学反应活性基团为炔基类基团，如端炔基、环辛炔、二苯并环辛炔；

优选地，所述第一化学反应活性基团和第二化学反应活性基团通过发生点击反应形成偶联结构，且所述第二化学反应活性基团修饰在所述药物损伤DNA的DNA链末端。

4.根据权利要求1所述的亲和探针，其中，所述药物损伤DNA的DNA长度为5-200bp，且其中一条DNA链上含有2-5个连续的鸟嘌呤，且所述连续的鸟嘌呤不位于DNA链的两端；

优选地，所述DNA的一条链序列如SEQ ID NO.1所示，其互补链序列如SEQ ID NO.2所示。

5.根据权利要求1-4中任意一项所述的亲和探针，其中，所述药物为通过共价或配位的方式与DNA结合以导致DNA构象发生改变的化学物质；

优选地，所述药物为金属抗肿瘤化合物；

更优选地，所述金属抗肿瘤药物为铂类抗肿瘤化合物，通式为[Pt(Ⅱ)A_mB_n]；

其中，A为单齿氨(胺)配体或双齿胺配体，如NH₃或NH₂C₂H₄NH₂；

B为反应离去基团，为单齿阴离子配体或双齿阴离子配体，所述单齿阴离子配体为优选为Cl^-，所述双齿阴离子配体优选为乙二酸双负离子；

其中，m与n的数值使得中心原子Pt(ΙΙ)的配位数为4。

6.根据权利要求1-5中任意一项所述的亲和探针，其中，相对于1mg的磁性纳米颗粒，所述药物损伤DNA的负载量为0.05-50nmol，优选为0.1-15nmol。

7.一种药物损伤DNA功能化磁性纳米亲和探针的制备方法，其特征在于，该制备方法包括以下步骤，

(1)将药物与DNA进行第一接触，得到药物损伤DNA；

(2)将步骤(1)得到的药物损伤DNA与磁性纳米颗粒进行第二接触，以使得磁性纳米颗粒上修饰的第一化学反应活性基团与DNA修饰的第二化学反应活性基团发生化学反应而共价键合生成偶联结构，所述偶联结构的一端与所述磁性纳米颗粒相连，另一端与所述药物损伤DNA相连。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其中，步骤(1)中，所述第一接触条件为：接触温度25-45℃，优选为35-40℃；接触时间为1-5天，优选为2-4天；

优选的，所述药物与DNA的摩尔比为0.1-10:1，优选为0.5-1:1。