[发明专利]一种湿地松胚性愈伤组织诱导与增殖的方法在审
| 申请号： | 201910296957.8 | 申请日： | 2019-04-12 |
| 公开（公告）号： | CN110012835A | 公开（公告）日： | 2019-07-16 |
| 发明（设计）人： | 程强强;杨春霞;丁伟;谷振军;肖复明;杜强 | 申请（专利权）人： | 江西省林业科学院 |
| 主分类号： | A01H4/00 | 分类号： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人： | 胡群 |
| 地址： | 330032 江西省南昌市*** | 国省代码： | 江西;36 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 胚性愈伤组织 湿地松 基础培养基 水解酪蛋白 谷氨酰胺 诱导培养 卡拉胶 增殖的 增殖 诱导 麦芽糖 呋喃甲基腺嘌呤 二氯苯氧乙酸 氨基腺嘌呤 诱导培养基 增殖培养基 增殖培养 未成熟 乙磺酸 蔗糖 肌醇 吗啉 水物 种胚 | ||
1.一种湿地松胚性愈伤组织诱导与增殖的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)胚性愈伤组织的诱导培养：将未成熟的湿地松种胚置于胚性愈伤组织诱导培养基上进行诱导培养，获得初代胚性愈伤组织，所述胚性愈伤组织诱导培养基是以DCR培养基为基础培养基，并添加蔗糖30g/L、卡拉胶7g/L、2，4-D1.0mg/L-2.5mg/L、KT1.0mg/L-2.5mg/L、L-谷氨酰胺300mg/L、水解酪蛋白250mg/L-500mg/L、肌醇1g/L、2-(N-吗啉)乙磺酸一水物250mg/L；
(2)胚性愈伤组织增殖：将步骤(1)获得的胚性愈伤组织转移到增殖培养基中进行增殖培养，获得增殖胚性愈伤组织，所述胚性愈伤组织增殖培养基是以DCR培养基为基础培养基，并添加麦芽糖30g/L、卡拉胶7g/L、2，4-D 0.5mg/L-1.0mg/L、6-BA 0.5mg/L-1.0mg/L、L-谷氨酰胺300mg/L、水解酪蛋白250mg/L-500mg/L。
2.根据权利要求1所述的一种湿地松胚性愈伤组织诱导与增殖的方法，其特征在于，所述步骤(1)中的外植体的选择方法是：取生长势好、无虫害，天然授粉的湿地松球果，将种子球果消毒后剥离出种子，再将种子种皮剥去获得未成熟的种胚作为外植体。
3.根据权利要求1所述的一种湿地松胚性愈伤组织诱导与增殖的方法，其特征在于，所述步骤(1)中诱导胚性愈伤组织的诱导培养基是以DCR培养基为基础培养基，并添加蔗糖30g/L、卡拉胶7g/L、2，4-D2.0mg/L、KT2.5mg/L、L-谷氨酰胺300mg/L、水解酪蛋白500mg/L、肌醇1g/L、2-(N-吗啉)乙磺酸一水物250mg/L。
4.根据权利要求1所述的一种湿地松胚性愈伤组织诱导与增殖的方法，其特征在于，所述步骤(1)中诱导胚性愈伤组织的诱导培养基的pH值为5.8。
5.根据权利要求1所述的一种湿地松胚性愈伤组织诱导与增殖的方法，其特征在于，所述步骤(1)中诱导胚性愈伤组织的条件为：培养温度(23±1)℃，湿度60％-65％，持续暗培养2个月。
6.根据权利要求1所述的一种湿地松胚性愈伤组织诱导与增殖的方法，其特征在于，所述步骤(2)中胚性愈伤组织的增殖培养基是以DCR培养基为基础培养基，并添加麦芽糖30g/L、卡拉胶7g/L、2，4-D0.5mg/L、6-BA1.0mg/L、L-谷氨酰胺300mg/L、水解酪蛋白500mg/L。
7.根据权利要求1所述的一种湿地松胚性愈伤组织诱导与增殖的方法，其特征在于，所述步骤(2)中胚性愈伤组织的增殖培养基的pH值5.8。
8.根据权利要求1所述的一种湿地松胚性愈伤组织诱导与增殖的方法，其特征在于，所述步骤(2)中胚性愈伤组织增殖培养条件为：培养温度(23±1)℃，湿度60％-65％，每15d继代一次。
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